模拟微重力对人牙髓干细胞在PLGA支架上黏附与增殖影响的研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shylockbc
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目的:研究模拟微重力(simulated microgravity,SMG)对人牙髓干细胞(humanDental Pulp Stem Cells,hDPSCs)在聚乙醇酸-聚羟基乙酸共聚物(poly-lactic-co-glycolic acid,PLGA)三维支架上黏附与增殖的影响。  方法:1.复苏hDPSCs,传代扩大培养至第5代后,SMG条件下接种于3×3×3mm3的PLGA支架,接种细胞数分别为0.2×106、0.4×106、0.8×106、1.2×106个/支架,以常规条件接种作为对照组。24h后取出细胞-支架复合物,通过扫描电镜观察细胞-支架复合物内细胞形态及细胞分布;收集细胞,台盼蓝染色,用血细胞计数板计数活细胞数,并计算细胞黏附率。  2.常规条件下将hDPSCs以0.2×06个/支架接种于PLGA支架,24h后将细胞-支架复合物分成两组,一组移至24孔板行常规培养,另一组移至旋转细胞培养系统容器中行SMG条件培养。于2、4、6天分别取出细胞-支架复合物,收集细胞接种子96孔板,MTT法检测吸光值(每孔设4个复孔,结果取平均值);于第4天收集细胞,行BrdU掺入法检测BrdU阳性细胞百分比。  3.实验结束后数据用SPSS13.0统计软件处理,细胞黏附率及OD值组内行单因素方差分析,组间行独立样本t检验;BrdU阳性细胞百分比行独立样本t检验。  结果:SMG条件接种组随接种细胞数的增多,黏附率显著升高(P<0.01),常规条件接种组黏附率略有降低(P<0.05);当接种细胞数为0.4×106、0.8×106、1.2×106个/支架时,实验组高于对照组(P<0.05或P<0.01);为0.2×106个/支架时,对照组显著高于实验组(P<0.01)。SEM显示SMG条件接种组的细胞具有丰富的表面微绒毛,细胞在支架内的分布更均匀。SMG条件下进行细胞培养至第4天及第6天时,MTT法检测所得OD值均高于常规条件培养组(P<0.01);第4天时以BrdU掺入法检测的BrdU阳性细胞率较常规条件培养组高(P<0.01)。  结论:SMG条件下hDPSCs在PLGA支架上的黏附率高于常规条件,且细胞在支架内分布更均匀;SMG条件下hDPSCs在PLGA支架上的增殖高于常规条件。
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