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临床研究:
目的:观察心衰合剂对CHF患者心肌细胞凋亡的影响。
方法:研究对象为2011年4月～2012年4月于首都医科大学附属北京中医医院、平谷区中医医院、北京房山区中医医院住院诊断为CHF的患者。实验对象以1:2的比例随机分为两组,西药组(22例)及心衰合剂专西药组(52例)。西药组按常规西药进行治疗,心衰合剂+西药组则对CHF患者首先进行辨证分型,辨证后使用心衰合剂辨证治疗(泻肺利水法、益气泻肺利水法)。入院后及治疗两周后测定血清中细胞凋亡相关因子sFas/Apo-1、sFasL、Bc1-2、Bax含量及BNP、LVEF及LVED,并观察心衰合剂的临床疗效。
结果:
①西药组及心衰合剂+西药组治疗前后血清中sFas/Apo-1、sFasL含量均显著降低(P＜0.01);心衰合剂+西药组与西药组相比,sFas/Apo-1及sFasL水平明显降低(P＜0.05)。亚组分析显示,泻肺利水心衰合剂、益气泻肺利水心衰合剂均可显著降低患者血清中sFas和sFasL的含量。
②西药组及心衰合剂+西药组治疗前后血清中Bc1-2水平均显著提高(P＜0.01);与西药组相比,心衰合剂+西药组Be1-2水平显著上升(P＜0.01),亚组分析显示,两种心衰合剂治疗的患者,血清中Bc1-2的表达显著提高(P＜0.01)。西药组治疗后,患者血清中Bax含量无明显改变(P＞0.05),心衰合剂+西药组Bax显著降低,且低于西药组治疗后水平(P＜0.01)。泻肺利水心衰合剂治疗两周后,Bax含量有所下降,但无统计学意义(P＞0.05),益气泻肺利水心衰合剂则可明显降低患者血清中Bax的含量,具有统计学意义(P＜0.01)。
③两组治疗后血清中GDF-15水平均显著下降(P＜0.01);与西药组相比,心衰合剂+西药组GDF-15虽略降低,但无统计学意义(P＞0.05)。两种心衰合剂与治疗前自身相比较,均能显著降低患者血清中GDF-15的含量,具有统计学意义(P＜0.01)。
④心衰合剂+西药组与西药组相比,心衰合剂十西药组BNP水平下调,INEF值升高(P＜0.05)。心衰合剂+西药组治疗后与治疗前相比,LNED下降(P＜0.01),但与西药组治疗后相比无统计学意义(P＞0.05)。泻肺利水心衰合剂及益气泻肺利水心衰合剂均可显著降低心衰患者的BNP指标(P＜0.01),LNEF显著改善(P＜0.01),LNED同样有所降低,但无统计学差异(P＞0.05)。
⑤与西药组相比,心衰合剂+西药组可以显著减轻患者中医证候积分(P＜0.01),有效减少Lee氏计分并改善患者心功能(P＜0.05)。泻肺利水心衰合剂组及益气泻肺利水心衰合剂组的中医证候积分显著降低(P＜0.01),心衰疗效积分优于治疗前,差异具有统计学意义(P＜0.01),心功能均得到明显改善(P＜0.01)。
结论:心衰合剂可通过下调sFas及sFasL水平,上调Bc1-2,抑制Bax表达,从而抑制心肌细胞的凋亡;西药组及心衰合剂+西药组均可下调GDF-15水平,但无明显差异。心衰合剂能够有效降低患者BNP水平,提高LNEF值,降低LNED,减轻临床症状,改善患者心功能。
基础研究:
目的:观察温阳益气,泻肺利水的心衰合剂对小鼠体外心肌细胞肥大模型细胞凋亡的影响。
方法:培养大鼠乳鼠原代心肌细胞,通过AngII建立肥大心肌细胞模型。实验分为7组,即正常对照组、模型组、5%空白血清组、5%心衰合剂含药血清组(5%含药血清组)、10%空白血清组、10%心衰合剂含药血清组(10%含药血清组)、卡托普利组。采用形态学和免疫细胞化学两种方法分别鉴定心肌细胞;通过图像处理软件测算心肌细胞面积;台盼兰拒染法检测细胞活力;Hoechst33342染色检测心肌细胞的早期凋亡率;乳酸脱氢酶试剂盒评价细胞受损程度,Western-blot法检测Grp78、caspase-12、JNK、CHOP蛋白的表达水平。
结果:心肌细胞鉴定显示心肌细胞阳性率≥95%,保证了实验结果的真实性和可靠性。
①模型组心肌细胞较正常对照组细胞面积明显增大(P＜0.05);细胞活力下降、LDH释放率上升(P＜0.05);凋亡率显著提高(P＜0.01);Grp78、caspase-12、JNK、CHOP蛋白表达水平明显上调(P＜0.01)。
②与5%空白血清组相比,5%含药血清组未能防止心肌细胞肥大;但可提高细胞活力(P＜0.05),心肌细胞早期凋亡率显著降低(P＜0.01);LDH释放率无明显降低。
③与10%空白血清组相比,1096含药血清组可抑制心肌细胞肥大的发生(P＜0.05);心肌细胞活力虽有所提高但无统计学意义(P＞0.05);心肌细胞早期凋亡率显著降低(P＜0.01);LDH释放率降低(P＜0.05);可以显著下调Grp78、caspase-12、CHOP蛋白表达水平(P＜0.01),并降低JNK的表达(P＜0.05)。
④10%含药血清组与5%含药血清组相比,10%含药血清组抑制细胞肥大(P＜0.05),细胞活力略有升高,但无统计学差异(P＞0.05);细胞早期凋亡率显著降低(P＜0.01);LDH释放率降低(P＜0.05)。
结论:
①经心衰合剂含药血清干预的肥大细胞可有效抑制细胞肥大,提高细胞活力,降低细胞早期凋亡率,减少LDH的释放。
②与5%含药血清组细胞相比,10%含药血清组细胞更能防止细胞肥大,降低凋亡率及LDH释放,提示心衰合剂具有最佳剂量,降低药物浓度将会影响其保护作用。
③心衰合剂可以下调内质网应激相关蛋白Grp78、caspase-12、JNK及CHOP的表达水平,提示心衰合剂通过减轻内质网应激防止细胞发生凋亡,保护心肌细胞。