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目的:将邱教授用于治疗血管性痴呆(VD)的临床经验方研制开发为使用方便、利于吸收的苗药新药萸姜外用贴剂,且初步探讨其对VD的药效作用。 方法: 1.工艺研究。提取工艺:以君药吴茱萸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的总转移率为指标,结合抗动物脑缺血的药效学评价,采用单因素考察和Lg(3)4正交设计优选最佳的提取工艺。纯化工艺:运用高效液相色谱(HPLC)法检测吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量,以吸附量和洗脱量为评价指标,确定大孔吸附树脂的类型;通过考察吴茱萸碱、吴茱萸次碱的总泄漏量,确定最佳的上样量;以洗脱量为考察指标,结合抗动物脑缺血的药效学评价,确定最佳的洗脱溶剂;通过考察不同上样浓度下的吸附量、比吸附量,确定最佳的上样浓度。成型工艺研究:以贴剂的外观性状总评分为指标,采用单因素考察和L9(3)4正交设计优选最佳基质配方。 2.质量标准的研究。以吴茱萸碱和吴茱萸次碱为对照品,采用高效液相色谱法分别建立吴茱萸碱和吴茱萸次碱含量测定方法并进行方法学研究。采用薄层色谱法(LTC)分别建立贴剂中吴茱萸、大果木姜子油、见血飞和艾片的鉴别方法。 3.初步药效学研究。分别采用双颈动脉反复夹闭法制成脑缺血再灌注小鼠模型,线栓法制成局灶性脑缺血再灌大鼠模型。采用跳台法和避暗箱法测各组动物的学习记忆能力,并采用分光光度法检测脑组织中一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、乙酰胆碱(Ach)、乙酰胆碱酯酶(AchE)的含量。 结果: 1.优选出最佳提取工艺为10倍量70%乙醇回流提取3次,每次1h。最佳纯化树脂类型为D101型,最佳的纯化工艺为药材量∶树脂量(1∶1)上样,分别用30%乙醇和70%乙醇洗脱,上样浓度为0.5g生药/ml。最佳基质配方:聚乙二醇2000(PEG2000)0.4g,聚乙烯吡咯烷酮(PVP)1.2g,凡士林0.2g,甘油0.4g。且所制备的贴剂均匀度、粘性和皮肤随性均好。 2.建立了贴剂的HPLC含量测定方法:色谱柱为C18柱,流动相为[乙腈:(水∶四氢呋喃∶磷酸)(50∶1∶0.2)][43∶57],检测波长为225nm,柱温为30℃,流速为1.0ml/min。进行方法学验证发现,所建立的含量测定方法和薄层鉴别方法稳定、可行,重现性好,可用于贴剂的质量控制。 3.和正常组比较,在跳台实验和避暗实验中,模型组小鼠被电击的潜伏时间和错误次数均有显著性差异,大鼠避暗箱潜伏时间和错误次数也都有显著性影响,模型组大鼠脑组织中NO明显增加,SOD明显降低,Ach含量明显降低,AchE含量明显增加;和模型组比较,萸姜贴剂及喜得镇灌胃组的潜伏时间有所延长,提高学习记忆正确率,大鼠脑组织中NO、AchE含量明显降低,SOD、Ach含量明显增高。 结论:萸姜贴剂的制备工艺合理且可行,对血管性痴呆有治疗作用,作用机制可能与增加血流量,降低受损脑组织中NO含量,保护缺血脑组织中SOD活性,增加脑组织中Ach含量,降低AchE含量。建立的贴剂含量测定方法和薄层鉴别方法稳定可行。