链霉菌702所产抗真菌活性物质的分离提取和制剂工艺研究

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本文从链霉菌702发酵液中分别用溶媒提取抗真菌活性物质粗品和利用柱层析从粗品中分离纯化抗真菌活性物质农抗702,然后分别对农抗7021%可湿性粉剂和1%水剂制剂工艺进行研究以及进行了制剂对防治植物病原真菌的应用研究。   为了获得链霉菌702所产抗真菌活性物质农抗702,从链霉菌702罐上发酵生产的具有抗真菌活性单位10000mg/L发酵液200L中经乙醇浸提液浓缩后得到含抗真菌活性单位22500mg/L的油状物80L,浸提率为90%;80L油状物经乙酸乙酯萃取浓缩得含抗真菌活性单位120000mg/L的12L浸膏,萃提率为80%。500g浸膏经硅胶柱层析,获得含抗真菌活性单位达750mg/g的粗品48.0802g。经250mm×500mm硅胶(G200-300目)层析柱得到含抗真菌活性物质9.274g。   1.0%农抗702可湿性粉剂制剂工艺研究,利用单因素实验对4种载体进行筛选,确定最佳载体配比,并通过正交实验优化制剂中助剂羧甲基纤维素钠、NNO、0903、阿拉伯树胶的最佳组合配比。得到农抗7021%可湿性粉剂优选配方为农抗702:10%;羧甲基纤维素CMC:2%;奈磺酸盐NNO:10%;湿展剂0903:6%;阿拉伯树胶:0.2%;硅藻土/高岭土6/4:补足至100%。样品外观为黄色或淡黄色疏松粉末,质量符合国家相应标准。   1.0%农抗702水剂剂制剂工艺研究,通过单因素试验考察不同水质(水:自来水、标准硬水、去离子水)、乳化剂(0203B、2201、OP-7、OP-10、农乳500、农乳600)及不同浓度增稠剂黄原胶的影响进行助剂和配方筛选。得到农抗7021%水乳剂制剂优选配方为农抗702的有效成分10%,十二烷基苯磺酸钙5.0%,黄原胶0.2%,标准硬水补足至100%。制成的农抗7021%水乳剂各项理化性能指标均达到国家标准。   为了探索农抗7021%制剂对香蕉枯萎病菌尖孢镰刀菌作用效果,试验分别以农抗7021%制剂、链霉菌702发酵液,农抗702两个单体组分和和那他霉素为阳性对照抗生素,采用菌丝生长速率法,对香蕉枯萎病菌尖孢镰刀菌古巴专化型1号和4号生理小种(FOC1、FOC4)的抗菌活性的毒力测定。结果那他霉素对FOC1,FOC4的EC50和EC90分别为2.08μg/mL、1.71μg/mL和6.6μg/mL、11.96μg/mL;样品Dzp9对FOC1,FOC4的EC50和EC90分别为4.67μg/mL、3.41μg/mL和21.54μg/mL、53.09μg/mL;农抗702对FOC1,FOC4的EC50和EC90分别为20.98μg/mL、16.84μg/mL和50.68μg/mL、62.18μg/mL;1%农抗702可湿性粉剂对FOC1,FOC4的EC50、EC90分别为26.99μg/mL,76.59μg/mL和14.67μg/mL,33.27μg/mL;1%农抗702水剂对FOC1,FOC4的EC50、EC90分别为23.77μg/mL,40.01μg/mL和45.15μg/mL,143.54μg/mL。试验结果表明:那他霉素、Dzp9样品和农抗702这三种抗生素、1%农抗7021%可湿性粉剂和1%农抗7021%水乳剂对供试的靶标菌有较好的抑菌作用,但而供试靶标菌对Dzp8样品不敏感。
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