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本研究围绕鸭致病性肠炎沙门氏菌外膜蛋白开展了以下研究:①鸭致病性肠炎沙门氏菌外膜蛋白超微结构观察和SDS-PAGE、免疫印迹分析;②将提取的外膜蛋白制成亚单位疫苗按一定剂量免疫雏鸭(OMPs 150μg)和小鼠(OMPs 30μg),免疫后14d皮下注射肠炎沙门氏菌鸭0.2mL(4×10~9CFU/mL)活菌/只,小鼠0.2mL(1×10~7CFU/mL)活菌/只。观察7d,记录发病死亡情况,测定疫苗的保护率。③将提取的外膜蛋白制成亚单位疫苗按一定剂量(OMPs 150μg)免疫雏鸭,在免疫后的1d、7d、14d、21d、28d、35d、42d采抗凝血和凝血各一份。采用淋巴细胞增殖试验(MTT法)及间接ELISA分别对雏鸭的细胞免疫和体液免疫进行检测。④将提取的外膜蛋白制成佐剂苗按一定剂量(OMPs 30μg)免疫小鼠,全菌灭活佐剂苗0.2mL/只免疫小鼠,在免疫后1、4、7、10、14天采抗凝血和凝血分别用于淋巴细胞增殖试验(MTT法)及间接ELISA分别对小鼠的细胞免疫和体液免疫的检测。获得结果如下:1.超微结构:外膜蛋白负染后透射电镜下3万倍放大可以看到外膜蛋白呈双层泡膜状结构,形态主要呈C型。2.SDS-PAGE分析:9株菌的外膜蛋白电泳图非常相似,每个泳道上都含有主要4条主要的蛋白多肽,个别泳道上出现了5条或者6条蛋白带。其中36kD为9株菌所共有且含量最高,是主要蛋白。3.免疫印迹分析:9株菌的外膜蛋白经SDS-PAGE后进行免疫印迹试验,发现各菌株都有1条分子量为36kD的蛋白多肽与抗鸭肠炎沙门氏菌阳性血清发生免疫反应,呈现出阳性条带。4.外膜蛋白免疫攻毒保护实验:外膜蛋白亚单位疫苗免疫雏鸭能够抵抗致死量同源菌的攻击,保护率100%;而空白对照组则全部死亡,剖检具有典型病变。外膜蛋白佐剂苗和全菌灭活苗免疫小鼠后,可以抵抗致死量同源菌的攻击,外膜蛋白组保护率90%,灭活苗组保护率80%,对照组全部死亡。5.体液免疫和细胞免疫检测(1)外周血抗体IgG水平:雏鸭血清中特异性抗体OD值从免疫后第7d开始升高,第21d达到最大值(OD值达0.642),以后开始下降,直到第42d OD值仍维持一定水平;从免疫后第7d始,直到第42d,免疫组抗体OD值均高于非免疫对照组差异极显著(P＜0.01)。小鼠免疫后经过间接ELISA检测可以看出,免疫组抗体OD值均高于非免疫对照组差异显著(P＜0.05),全菌灭活苗组抗体OD值低于外膜蛋白苗组,但两种疫苗之间的差异不显著(P＞0.05)。(2)T淋巴细胞对ConA的反应能力:雏鸭免疫外膜蛋白后,从第14d开始外周血淋巴细胞对ConA的刺激有明显的反应,第21d时OD值达到最大值(0.500),以后开始下降,第14-28d免疫组OD值均高于非免疫对照组异极显著(P＜0.01)。外膜蛋白免疫小鼠后外周血T淋巴细胞对ConA有明显的反应性,在第7d时,T淋巴细胞对ConA的反应能力就明显高于灭活苗组(P＜0.05)和空白对照组(P＜0.01),第14d仍维持很高的水平。