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目的:探讨人A549细胞系耐顺铂的形成机制,依布硒啉（ebselen）对A549细胞系多药耐药（MDR）的阻滞作用及途径,依布硒啉对A549/DDP细胞的多药耐药性的逆转,及低氧诱导因子-1a（hypoxia inducible factor-1a,HIF-1a）在依布硒啉阻滞及逆转顺铂所致的多药耐药机制中的作用。方法:将不同浓度的顺铂、依布硒啉作用于A549、A549/DDP细胞,测定细胞形态及各项生化指标,检测相关蛋白表达水平及多药耐药基因异同。采用MTT检测法测定细胞活力,半数抑制率。细胞形态变化用倒置显微镜观察,划痕作为肿瘤迁移率的判断。ROS含量用DCFH-DA探针法测定,谷胱甘肽过氧化物酶活力用GSH-PX试剂盒检测,凋亡用hoechst 33342检测,P-gp、HIF-α荧光定位用免疫荧光标记法,P-gp、HIF-1α、Akt、PI3K、Bax、Bcl-2、E-cadherin、Caspase-3蛋白的表达水平用免疫印迹法检测。在A549细胞中,用二氯化钴营造低氧模型,雌二醇干扰HIF-1a,观察HIF-1a、P-gp蛋白在细胞中的表达的差异。在A549/DDP细胞中,采用PCR检测基因水平;siRNA干扰HIF-1α,免疫荧光检测HIF-1a,P-gp的蛋白表达水平。结果:A549细胞随着顺铂浓度的升高而损伤加重,并有一定剂量依赖性。同时,损伤的A549细胞内活性氧类物质含量明显提高,细胞活力下降,皱缩变圆出现凋亡。此外,顺铂可使A549细胞P-gp、HIF-1a、Akt、PI3K蛋白表达上调,HIF-1a从胞质向细胞核聚集转位;E-cadherin下调,迁移率增加,Bax/Bcl-2比例增加,凋亡细胞增多。氯化钴上调HIF-1a表达,不改变P-gp含量。雌二醇干扰HIF-1a后,A549细胞中HIF-1a,P-gp的蛋白表达水平明显下降。顺铂同4mmol·L-1的依布硒啉合用,细胞迁移率降低,细胞凋亡数增加,活性氧降低,HIF-1α、P-gp降低,Caspase-3增加,Bax/Bcl-2比例升高,E-cadherin增加。依布硒啉降低A549/DDP细胞中的活性氧,降低了P-gp、HIF-1α蛋白的表达水平。依布硒啉与顺铂合用时使Caspase-3蛋白上调,Bax/Bcl-2比值增大。在A549/DDP细胞中,si RNA干扰HIF-1a后,细胞中HIF-1a,P-gp的表达明显下降;4mmol·L-1依布硒啉可以大幅度降低ROS含量,下调HIF-1a,P-gp的蛋白表达水平;与顺铂合用,4mmol·L-1依布硒啉能明显抑制细胞活力,其半数抑制率所需顺铂浓度降低。结论:顺铂可剂量性致使A549细胞中ROS升高,导致HIF-1α、P-gp的上调,进而对药物耐受。加入顺铂的同时加入依布硒啉,通过降低A549细胞内的ROS、HIF-1α,阻滞其耐药性的形成,协同顺铂所致的凋亡效应,并抑制肿瘤迁移发生。依布硒啉能打破A549/DDP细胞内的活性氧稳态,降低HIF-1α的稳定性,减少P-gp的表达,从而达到肿瘤多药耐药性的逆转。