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目前，市场中的许多功能饮料都添加了B族维生素。B族维生素是水溶性维生素中重要的一类，当人体中缺乏B族维生素时可导致多种疾病的产生，而人体自身又无法合成这些化合物，适当饮用功能饮料可给予补充。功能饮料中维生素的含量是影响其功能的主要因素，因此为了保护消费者利益，建立功能饮料中B族维生素的测定方法是非常重要的。 本研究建立了高效液相色谱法测定功能饮料中B族维生素含量的方法。考察了流动相的组成、配比、流速、柱温、pH值和检测波长对测定的影响，确定了最佳色谱条件：kromasil C18柱；紫外检测，检测波长为200 nm、270 nm；柱温30℃；流速为1.0 mL／min；进样量10.0μL。在最佳实验条件下，绘制了标准曲线，其线性范围为0.5～100μg／mL，相关系数为0.9994～0.9999。各组分的检出限为0.006～0.04μg／mL，平均回收率93.5％～108.2％，相对标准偏差0.4％～4.4％。实现了12 min内对维生素B1、B2、B6、B12、烟酸、烟酰胺及泛酸的同时测定。 通过实验建立了测定功能饮料中维生素B2和B6的同步荧光法。通过条件实验，确定了最佳实验条件：波长差△λ为70nm，扫描速度为150nm／min，入射和出射狭缝宽度均为10nm，测定波长：B2／448nm，B6／323nm。在最佳实验条件下，绘制了标准曲线，在0.01～0.15μg／mL线性良好，维生素B6和B2的线性相关系数分别为0.9993和0.9991。维生素B6的检出限为0.3ng／mL，B2的检出限为0.1 ng／mL。对4种样品进行了测定，维生素B6的平均回收率为96.4％～98.5％，相对标准偏差为1.2％～2.7％；维生素B2的平均回收率为98.3％～100.0％，相对标准偏差为1.5％～2.9％。 研究结果表明，高效液相色谱法具有灵敏、准确、线性范围宽、可同时测定多种维生素的特点，适于样品中多种B族维生素的同时测定。同步荧光法简便、快速、准确，具有高灵敏度，适于样品中痕量的特定B族维生素的测定。