【摘 要】
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我们首先利用大肠杆菌表达了47kDa抗原蛋白的部分片段.采用PCR方法扩增了包括信号肽序列在内的47kDa抗原蛋白全基因序列,并将其插入pUCm-T载体中,通过PCR、限制性内切酶分析
【出 处】
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中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院
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我们首先利用大肠杆菌表达了47kDa抗原蛋白的部分片段.采用PCR方法扩增了包括信号肽序列在内的47kDa抗原蛋白全基因序列,并将其插入pUCm-T载体中,通过PCR、限制性内切酶分析和序列测定进行鉴定,将序列正确的质粒命名为pUCm-T／47.再利用PCR方法,从pUCm-T／47中扩增出47kDa蛋白基因部分片段,鉴定后将该片段克隆于原核表达载体pBV220,构建成重组质粒pBV-47.用该重组质粒转化E.coli,转化子在42℃诱导表达,用SDS-PAGE方法检测表达产物,在相对分子量40×10<3>处有表达带.经薄层扫描分析,目的蛋白占全菌蛋白的19﹪.进一步的蛋白免疫印迹检测证明该重组蛋白可以特异性的与鼠抗恙虫病东方体Karp株的多克隆抗体结合.为进一步研究该重组蛋白的免疫原性,我们用重组蛋白混合石蜡油以腹腔注射方式免疫Balb／c小鼠.一次加强免疫后,用IFA方法可在鼠免疫血清中检测到抗恙虫病东方体Karp株抗体,其抗体水平为1：320.
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