【摘 要】
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破伤风是由破伤风毒素引起的一种严重的痉挛性疾病,有效的预防方法是接种破伤风类毒素疫苗。传统的类毒素疫苗是破伤风毒素经甲醛脱毒、精制而成的,现仍存在一些问题:接种类
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破伤风是由破伤风毒素引起的一种严重的痉挛性疾病,有效的预防方法是接种破伤风类毒素疫苗。传统的类毒素疫苗是破伤风毒素经甲醛脱毒、精制而成的,现仍存在一些问题:接种类毒素后有一定的副反应发生;破伤风梭菌可形成芽孢形式,毒性高,生产疫苗有一定危险性;甲醛处理类毒素容易造成污染;化学处理后的类毒素可能发生毒性逆转。因此,现有的类毒素疫苗还需进一步改进和发展,开发新型的基因工程疫苗是方向之一。本研究以破伤风毒素C片段基因为基础,用大肠杆菌表达系统得到了高效表达的融合蛋白,之后又用沙门氏菌表达系统构建了运送破伤风毒素C片段的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌菌株,为研制新型的破伤风疫苗奠定了基础。 1.破伤风毒素C片段基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 本研究对破伤风毒素C片段进行基因克隆、重组表达、蛋白纯化和免疫原性分析。应用PCR技术直接从破伤风梭菌64008菌株中扩增出大小为1356bp的破伤风毒素C片段基因,该片段是与靶细胞起结合作用的重链C端基因,经DNA序列测定分析,扩增出的基因与GenBank上登陆的序列AF154828的同源性达到99.2%。将此基因克隆入大肠杆菌融合表达载体pET-30a(+),构建成重组表达质粒pET-TetC,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达,经SDS-PAGE蛋白电泳鉴定,表达产物为50kD左右的特异性重组蛋白,重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的33.5%,
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