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Ⅰ.随着生活压力增大,环境污染加剧,恶性肿瘤的发病率越来越高,所以寻找一种高效治疗方法已成为近年的研究重点。CTTNBP2NL(CTTNBP2N-terminal like)编码的蛋白为N末端样皮肌动蛋白结合蛋白2,与CTTNBP2同源,在神经系统的发生过程中起重要作用。又因为腺病毒在病毒疗法中具有稳定性好,宿主范围广,使用安全的优点。我们将CTTNBP2NL基因插入到腺病毒载体上,构建了非复制型重组腺病毒Ad-CTTNBP2NL。利用MTT法检测重组病毒对不同癌细胞系增殖有抑制作用。结晶紫实验观察到重组腺病毒对癌细胞有很好的杀伤效果。通过Hoechst33258染色和流式细胞术实验分析携带CTTNBP2NL基因的重组腺病毒可以诱导细胞凋亡。转染pEGFP-LC3-C1到癌细胞后,感染重组病毒检测癌细胞没有自噬。Western blot检测细胞内凋亡相关蛋白及自噬相关蛋白的表达量,证明CTTNBP2NL基因通过凋亡途径诱导癌细胞死亡。本实验为将CTTNBP2NL基因运用到癌症的治疗上提供了一定的理论基础。Ⅱ.在海洋自然资源中,海洋凝集素在治疗癌症方面具有很大的潜力。其中UPL1(Ulva pertusa lectin 1)能够对红细胞起凝集作用,具有研究价值。本实验在已有的研究基础上对UPL1和细胞信号通路之间相互作用的关系做了进一步的探究。通过IP检测UPL1与PRMT5(精氨酸N端甲基化转移酶5)、β-Tubulin、β-Actin的相互作用。利用激光共聚焦显微镜观察UPL1和MEP50WD(WDR77)的亚细胞定位。Western blot分别检测感染了复制缺陷型腺病毒Ad-UPL1的BEL-7404、Huh7细胞系中ERK、p-ERK、Akt、p38、p-p38、STAT、p-STAT、ISG15的表达量,以及自噬相关蛋白Beclin1、LC3-II的表达。EBSS饥饿处理诱导凋亡后,检测UPL1对癌细胞的存活率的影响。利用U0126(MEK抑制剂)、SB203580(p38抑制剂)、LY294002(PI3K抑制剂)分别处理癌细胞后,检测到UPL1可以导致癌细胞有更低的存活率。Western blot分析UPL1对β-Tubulin、Akt、PARP、caspase3蛋白有影响。UPL1在癌细胞中与MEK、p38、PI3K等信号通路存在关联。其在肿瘤治疗方面有广泛的应用前景。