AtSARK关键位点的点突变及其功能研究

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衰老作为植物生长发育的最后一个阶段,同时也是一个必经阶段,是由特殊的发育信号启动和调控的,需要一些信号传递途径参与。植物LRR型类受体蛋白激酶已被证明参与调节植物的生长发育过程、植物抗逆反应以及植物激素的信号传递等生命活动,并能够发挥重要作用。  本实验室前期发现,一个拟南芥的LRR-RLK编码基因AtSARK(Arabidopsithaliana senescence-associated receptor-like kinase),是拟南芥叶片衰老调控过程中一个正调节因子,并且AtSARK所介导的信号是借助于生长素和乙烯的协同作用而发挥作用的。AtSARK具有双底物特异性,可以在体外自磷酸化丝/苏氨酸残基和酪氨酸残基。对自磷酸化的AtSARK胞内域(AtSARKCD)进行质谱分析,共发现14个磷酸化位点。  本文旨在通过对AtSARK自磷酸化位点进行点突变,来研究AtSARK结构与功能的关系。对AtSARK的自磷酸化位点进行定点突变,分别突变为丙氨酸(A)或苯丙氨酸(F)模拟相关位点的非磷酸化状态、突变为天冬氨酸(D)模拟相关位点的磷酸化状态,以可诱导型启动子(诱导剂为地塞米松dexamethasone,DEX)控制AtSARK表达的转基因拟南芥为实验材料,探讨自磷酸化对SARK生物学功能的影响。发现AtSARK胞内域的一个苏氨酸残基个和酪氨酸残基位点对AtSARK生物学功能具有重要的影响。实验发现,这两个位点突变为丙氨酸后过表达突变的AtSARK不能诱导转基因植物早衰,而突变为天冬氨酸后过表达突变的AtSARK能够诱导转基因植株早衰。此外,某些位点单点突变也能造成AtSARK生物学功能的部分丧失,暗示了可能存在多位点的协同作用。
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