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根癌农杆菌介导的水稻转基因技术已取得很大的发展,但转化率低(特别是籼稻转化效率低)的问题是转基因育种进一步发展的障碍之一.提高水稻转基因效率,建立转基因实验体系是应用转基因育种的基础.本研究采用融合构建ipt基因的质粒LBA4404/pBAct-iptN-bar11<＃>为供体,选用R-527、K17B、R-6078、R-936、CDR22和多系1号共6个籼稻品种作为受体材料,进行了农杆菌介导的籼稻转基因实验体系的研究.主要研究结果如下:1、试验材料对不同基本培养基具有选择性.采用N<,6>、MS和NMB三种基本培养基进行诱导培养,诱导结果是:MS是诱导率最高的培养基,N<,6>也是较好的诱导培养基.采用MS<,1>、MS<,2>、NMB和NB分化培养基,分化试验结果是:MS<,2>是分化率最高的培养基,NMB比NB更有利于愈伤组织的分化.2、对水稻种胚愈伤组织诱导过程中污染情况的研究,发现污染主要来源于种胚表面的细菌和主要存在于胚乳中的内生真菌.针对种胚表面的细菌使用复合灭菌剂(6％NaClO30min+75％酒精0.5min+0.1％升汞8min)可以获得很好的消毒效果,而对于内生真菌则采取提前(如培养10d)继代的方式就可以有效地控制真菌污染.3、添加氨基酸的试验结果表明:不同基因型材料对氨基酸需求的种类和浓度有显著差异.0.4-0.6g/L的脯氨酸添加可以显著地提高愈伤组织的诱导率和质量,并且普遍适用;0.5g/L的谷氨酰胺给不同基因型材料带来截然不同的效果;水解酪蛋白0.3g/L的添加浓度有利于提高诱导率和质量,0.6g/L的添加浓度却强烈抑制愈伤组织的诱导、刺激种胚分化.4、2,4-D是诱导愈伤组织的必需因子,最适用量为2.0mg/L.2,4-D与KT、NAA配合使用对种胚培养有更好的效果,其最适配比因材料而异.5、在愈伤组织诱导过程中,低温抑制愈伤组织的诱导并延缓其生长.分化前的高渗预分化处理可显著提高分化率;部分干燥处理分化前的愈伤组织,不利于其分化;培养基中添加活性炭可以有效地降低褐化率,同时却阻碍愈伤组织分化.6、用诱导培养基重悬后的菌液浸染愈伤组织,其毒力急剧减弱;活化的菌液直接浸染愈伤组织,仅通过洗菌和含头孢霉素的培养基很难抑制农杆菌的生长;重悬过的菌液点滴在愈伤组织上的方法也存在不易抑制农杆菌生长的问题.