中国文昌鱼cDNA文库的分析及免疫相关基因的研究

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头索动物文昌鱼是目前存在的与脊椎动物最接近的无脊椎动物,是介于无脊椎动物和脊椎动物之间的过渡类型,其形体结构、发育模式和基因组都是脊椎动物最简单模型的代表,对头索动物——文昌鱼的发育遗传学研究有助于揭示脊椎动物的起源。除此以外,文昌鱼还是是研究原始适应性免疫系统起源与演化的理想模型,对文昌鱼免疫相关基因表达模式的研究可以揭示高等脊椎动物免疫系统的基本模型。本文运用cDNA文库构建技术,以厦门文昌鱼全鱼为研究材料,构建以真核表达载体pcDNA3为基础的cDNA表达文库。通过对4674个EST序列的测定和生物信息学分析,聚类得到2305条consensus序列,包括506个基因簇(cluster,每个基因簇包含2个以上的EST序列)和1799没有序列相似性的EST(singleton)。将聚类后得到的consensus序列与GenBank进行同源性比较,其中有922条能够比对上GeneBank中的序列。而将506个基因簇序列与GenBank进行同源性比较,结果41.96%的序列与已知的蛋白编码序列有较高的同源性。   本论文通过对已构建的文昌鱼6个cDNA文库的数据进行分析整理,对测序获得的6个文库的23095个克隆进行序列拼接后得到9009条相关基因序列,利用我们自行开发的生物信息学数据处理平台,将这些序列对NCBI的GenBank数据库进行BLASTX分析,最终得到3795条E值低于0.01的序列。   其中我们对上述十大类免疫相关基因中的七个免疫相关基因(RGA、RCH1、GILT、CD9、CD81、CD53、PBEF)进行了进一步的深入研究,首先克隆其全长基因,然后进行同源分析和其编码的蛋白质进行分析,从而做出系统进化分析。然后通过Southern杂交、原位杂交等方法研究其基因结构及表达情况,以此来推测它的功能。
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