论文部分内容阅读
先天性免疫系统控制病毒等病原体入侵的首要环节是快速调节宿主细胞相应基因的表达水平。细胞抗病毒状态的建立主要通过多种转录因子调控复杂的基因表达程序。转录因子IRF3(Interferon regulatory factor 3)在起始细胞抗病毒基因转录过程中发挥重要作用。当细胞受到病毒感染后，IRF3迅速入核并激活IFNβ，ISG56、IP10等一系列下游基因的表达。这些蛋白分子通过多种方式造成被侵染细胞表现出特殊的状态或迅速凋亡，从而控制病毒的复制和传播；同时诱导产生大量细胞因子和趋化因子等，启动适应性免疫反应的进程。
本论文的主要工作集中在IRF3转录活性的调控研究，发现Hsp90作为协同因子参与IRF3转录激活调节。除此之外，本文还阐述了TRAF6(Tumor necrosisfactor receptor-associated factor 6)的Coiled-coil结构域在激活NF-KB信号通路中的作用机制。这些研究结果有助于更好的认识IRF3转录调控的分子机制以及TRAF6如何起始自身泛素化的过程。
第一部分工作建立在酵母双杂交的基础上，本研究发现了与IRF3特异相互作用的调控蛋白-Hsp90。研究结果显示Hsp90参与了对IRF3转录激活的调控。发现C端缺失的Hsp90突变体可显著地抑制IRF3的激活。通过RNAi下调内源Hsp90的表达，可抑制Sendai Virus诱导的IRF3激活以及其靶基因的表达。Hsp90特异性抑制剂GA也可显著地抑制IRF3调控的基因表达，影响IRF3由胞质入核的转移以及其DNA结合活力。
进一步地研究，发现GA可阻断IRF3磷酸化，但并不影响IRF3的蛋白水平。由此，发现IRF3的上游激酶TBK1也能与Hsp90相互作用；GA处理细胞，可破坏Hsp90和TBK1的相互作用，导致TBK1稳定性下降并通过蛋白酶体降解。实验结果显示Hsp90，IRF3与TBK1在生理条件下以复合物的形式存在。在这个复合物中，Hsp90除了维持TBK1的稳定性，还可通过拉近TBK1与IRF3距离促进TBK1对IRF3的信号递。
综上所述，本研究揭示Hsp90在Sendai Virus诱导的IRF3激活过程中发挥了重要作用。
第二部分工作，研究了信号转导分子TRAF6的Coiled-coil结构域在激活转录因子NF-kB过程中的作用机制。TRAF6是一个重要的信号转导分子，参与调控包括先天性免疫反应，获得性免疫以及骨的新陈代谢在内的一系列生理过程。TRAF6在IL-1(Interleukin-1)和Toll-like receptor ligands激活NF-kB信号通路中发挥了必不可少的作用。以前的研究证明TRAF6是泛素连接酶，可与泛素结合酶复合物Ubc13/Uev1A协同作用能催化自身Lys-63型多聚泛素化的形成。TRAF6自身多聚泛素化对NF-kB信号通路的激活起到正调控作用。然而，TRAF6自身泛素化过程如何被调控的分子机制并不清楚。
本文发现TRAF6的Coiled-coil结构域对于TRAF6的自身泛素化及其激活NF-kB信号通路过程中发挥了重要作用。实验结果揭示该结构域并不包含TRAF6自身泛素化的位点，而是通过招募Ubc13/Uev1A介导TRAF6对下游通路的激活。