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本研究从课题组成功克隆的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)WHNB02中性植酸酶基因phyC(GenBankNo:AFAY220075)出发，从信号肽切割位点序列之后设计上游引物(引入一个SacI酶切位点)，在终止密码子处设计下游引物(引入一个BamHⅠ酶切位点)，通过PCR去除该酶的信号肽编码序列。PCR扩增得到大小约1.1Kb的单一条带产物，即为目的基因表达片段。该产物经回收纯化后连接到T载体pMD183T上，转化大肠杆菌JM109感受态细胞，经PCR，酶切，测序鉴定后，获得阳性克隆菌株。提取质粒，进行SacⅠ、BamHⅠ双酶切，与经相同双酶切处理的巨大芽孢杆菌表达载体pHIS1525连接，并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，筛选到阳性菌落后提取质粒，并电击转化巨大芽孢杆菌WH320电击感受态细胞，使之在表达载体自身信号肽的引导下进行分泌表达。在含有10μg/mL的Tet抗性平板上筛选后，经菌落PCR鉴定，获得阳性克隆菌株。通过植酸酶酶活测定表明：产物具有植酸酶活性。SDS-PAGE分析表明：该酶相对分子量约为55KDa。
初步优化基因工程菌的培养条件，结果表明：最优条件为接种5％种龄为12h的液体种子，培养4h加入终浓度为0.2％木糖诱导，诱导9h后上清液中酶活可达33U/mL，是出发菌株枯草芽孢杆菌WHNB02的165倍。基因工程菌经液体补料分批发酵9h后，中性植酸酶酶活达到45.3U/mL。
中性植酸酶由于研究较少，产酶量较低等原因的尚无商品投入市场。本研究在巨大芽孢杆菌中表达中性植酸酶，并有效的提高了其表达量，具有重要的学术价值和应用前景，为中性植酸酶作为商品投入市场打下了良好的基础。