杞精明目汤对结膜松弛症中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达影响的研究

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目的:  研究ColⅠ和ColⅢ在结膜松弛症结膜组织中的表达情况及杞精明目汤药物血清对结膜松弛症结膜成纤维细胞ColⅠ、ColⅢ的表达调控作用;观察杞精明目汤对CCh患者结膜厚度的影响。  方法:  1.结膜组织ColⅠ和ColⅢ的表达:制备结膜组织石蜡切片,采用免疫组化法和苏木精-伊红染色法检测ColⅠ和ColⅢ在正常结膜和CCh松弛结膜中的表达。  2.结膜组织的病理观察:采用苏木精-伊红染色观察正常结膜组织和CCh结膜组织中胶原蛋白的表现。  3.CCh结膜成纤维细胞ColⅠ和ColⅢ的表达:分别用正常培养基、含TGF-β1的培养基和不同浓度(10%、20%、30%)的杞精明目汤药物血清培养基体外培养结膜成纤维细胞加以干预,采用Western-Blot检测ColⅠ和ColⅢ的表达情况。  4.观察杞精明目汤对CCh患者结膜厚度的影响:收集60例CChⅡ~Ⅲ级肝肾阴虚型患者,随机分为杞精明目汤联合人工泪液治疗组和单纯人工泪液治疗对照组,疗程3个月,使用AS-OCT测量结膜厚度,测量两种治疗方法治疗前后CCh患者结膜厚度的变化。  结果:  1.CCh结膜组织ColⅠ和ColⅢ的表达:ColⅠ在CCh结膜组织中表达较正常组减少,ColⅢ在CCh结膜组织中表达较正常组增加。  2.TGF-β1对CCh球结膜成纤维细胞ColⅠ和ColⅢ表达的影响:TGF-β1可以显著使ColⅠ、ColⅢ的表达上调(t=-4.561,P=0.000<0.05;t=-3.535,P=0.002<0.05)。  3.杞精明目汤药物血清对CCh球结膜成纤维细胞ColⅠ和CollⅢ表达的影响:30%的含药血清可以有效上调ColⅠ的表达(P=0.013<0.05),而10%和20%的含药血清对ColⅠ的表达均无明显影响(P=0.232>0.05; P=0.736>0.05);20%和30%的含药血清可以有效上调ColⅢ的表达(P=0.015<0.05;P=0.001<0.05),两者之间差异无统计学意义(P=0.322>0.05),而10%的含药血清对ColⅢ的表达无明显作用(P=0.811>0.05)。  4.杞精明目汤联合人工泪液治疗和单纯人工泪液治疗结果的比较分析:杞精明目汤联合人工泪液治疗对CCh患者眼表症状有明显改善(t=22.620,P=0.000<0.05),与单纯人工泪液治疗相比有统计学意义(t=-10.111,P=0.000<0.05);两种治疗方法均可增加泪膜破裂时间(Z=-5.247,P=0.000<0.05; Z=-4.304,P=0.000<0.05),且两者之间有明显的统计学差异(Z=-3.751,P=0.000<0.05);杞精明目汤联合人工泪液治疗可增加CCh患者的基础泪液分泌(Z=-5.827,P=0.000<0.05),单纯人工泪液治疗则不能(Z=-2.002,P=0.066>0.05),且两者之间有统计学差异(Z=-5.680,P=0.000<0.05);杞精明目汤联合人工泪液治疗和单纯人工泪液治疗两种治疗方法对CCh患者的结膜厚度均无明显影响(t=-1.790,P=0.084>0.05; t=-1.209,P=0.236>0.05),两者之间差异无统计学意义(t=0.085,P=0.932>0.05)。  结论:  1.CCh结膜组织中ColⅠ的表达较正常组减少,ColⅢ的表达较正常组增加。  2.TGF-β1对CCh结膜成纤维细胞表达ColⅠ、ColⅢ的上调调控作用均高于三个不同浓度的杞精明目汤药物血清的影响,它们的作用机制或通路可能一样,但有待进一步研究。  3.30%的杞精明目汤药物血清上调ColⅠ的表达作用最明显;20%和30%的杞精明目汤药物血清对ColⅢ的上调作用与CCh正常对照组相比均有统计学意义。  4.杞精明目汤联合人工泪液治疗比单纯人工泪液治疗更能有效地改善肝肾阴虚型CCh患者的眼表刺激症状,延长其泪膜破裂时间,增加其基础泪液分泌量,但两种治疗方法对CCh患者的结膜厚度均无明显改善作用。
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