【摘 要】
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目的:本研究对可溶性人VEHI(第25~174位氨基酸)进行克隆、表达、高度纯化、并进 行抗肿瘤等生物学活性研究.方法与内容:1.以质粒 pBluescrpt-VEGI为模板,PCR扩增可 溶性VEGI
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目的:本研究对可溶性人VEHI(第25~174位氨基酸)进行克隆、表达、高度纯化、并进 行抗肿瘤等生物学活性研究.方法与内容:1.以质粒 pBluescrpt-VEGI为模板,PCR扩增可 溶性VEGI基因经EcoRl、BamHl双酶切酶,酶切产物定向插同样双酶切的pUC19质粒,转化后 ,阳性克隆送全自动荧光测序.2.将VEGL基因亚克隆入表达载体P<,R0>EXHTb,融合表达VEHL,获得含有6个His(组氨酸)的VEGL,经Ni-NTA spin 柱纯化并复性.3.重组VEGL对体外培 养的建株人脐静脉内皮细胞ECV304、大鼠肺源毛细血管内皮细胞及新生牛主动脉内皮细胞增殖的影响.4.重组VEGL对体外培养的B16细胞,L929细胞的毒性作用.5.重组VEGL对体内新 生血管形成和生长的影响.6.重组VEGL对小鼠体内S180肉瘤生长的影响.7重组VEGL可使荷S180小鼠的生存时间延长.8.重组VEGL对人脐静脉内皮细胞VCV304、大鼠肺源毛血管内皮细 胞及新生牛主动脉内皮细胞凋亡的影响.结论:重组可溶性人VEGL是一种强烈的新生血管形成.可溶性人VEHL具有抗肿瘤效应,肿瘤血管密度大大减低因此,VEGL抗肿瘤作用机制,主要是通过VEGL诱导血管内皮细胞凋亡,使血管萎缩、减少、甚至消失,从而使肿瘤处于、"休眠"状态,达到治疗效果.
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