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肌肉生成抑制素自发现以来一直被认为是调控抑制肌肉生长的主要影响因子,它能够抑制骨骼肌成肌细胞的增殖与分化,最新的研究表明它还对白色与棕色脂肪细胞的生长与分化具有抑制作用。当生物体内肌肉生成抑制素无法表达或者表达之后蛋白活性失活时,动物会出现肌肉生长异常快速并严重超出正常肌肉发育形态,肌纤维之间脂肪沉积增多但是皮下脂肪沉积减少的现象。很多科学研究者在畜牧生产中采用基因敲除、转基因等技术来降低甚至灭活生物体内肌肉生成抑制素抑制素的活性从而希望获得产肉量高、生长迅速、肉类品质好的畜牧品种。在临床医学与畜牧业生产过程中,研究并找出抑制肌肉生成抑制素生物学活性的方法具有十分重要的应用价值。但是目前人们对肌肉生成抑制素确切的作用机制与调控机理还不是很明确,生物体内肌肉生成抑制素在发挥功能的过程中有多种未知蛋白能与其结合,有些蛋白使肌肉生成抑制素处于非活性状态,阻止其发挥生物学作用,而当这些蛋白在一定条件下与肌肉生成抑制素分离之后,具有生物学活性的肌肉生成抑制素成熟蛋白释放出来,与骨骼肌细胞表面受体结合发挥负调控肌肉生长的作用,研究并发现新的肌肉生成抑制素结合蛋白将为抑制肌肉生成抑制素的功能从而促进肌肉细胞生长与分化增加新的途径。本研究通过构建用于酵母双杂交技术筛选未知蛋白的牛肌肉酵母双杂交cDNA文库以及酵母双杂交诱饵重组载体来为下一步研究筛选参与肌肉生成抑制素发挥生理机能的未知蛋白奠定基础。本研究中构建的酵母双杂交cDNA文库适应于酵母双杂交GAL4系统进行蛋白质相互作用研究。酵母双杂交技术通过诱饵重组蛋白与相应的候选基因表达的蛋白相互作用,激活报告基因的表达从而使酵母菌能够在缺少四种氨基酸的选择性培养基上生长,然后通过测序分析将阳性互作蛋白筛选出来。研究中首先通过RT-PCR特异性扩增肌肉生成抑制素成熟蛋白对应目的基因,与原核克隆载体重组并在大肠杆菌中获得大量克隆后又构建牛肌肉生成抑制素诱饵重组载体并在酵母菌中验证与表达。然后利用提取的高质量RNA和SMART技术PCR扩增合成了cDNA第二链片段并转化到酵母菌中通过体内重组的方法与文库线性载体连接构建了可以直接用于酵母双杂交的牛肌肉组织的酵母双杂交cDNA文库。通过本研究得到以下结果：能够表达肌肉生成抑制素成熟蛋白的诱饵重组载体pBDKT7-MSTN,对宿主菌Y2H没有毒性可以在酵母菌中稳定表达并且无自激活现象,表明载体构建成功；构建成功了牛肌肉组织的cDNA文库,基本包含了牛肌肉组织的遗传表达信息,文库滴度达到7×105pfu/mL,能够满足筛选目的蛋白的需要。