γIFN对增生性瘢痕中TGF-β影响的实验研究

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前言 瘢痕是组织进行修复后的产物,瘢痕一方面影响外观,瘢痕挛缩还可以造成关节活动障碍,给人们生活带来极大不便。烧伤后的瘢痕多为增生性,于创面愈合6个月后生长达到高峰。研究已经证明,瘢痕的增生挛缩程度与很多因素有关,而主要是与瘢痕中成纤维细胞不成比例增加,胶原的过度沉积有关。而许多细胞因子对瘢痕的增生挛缩起到一定的作用,其中研究最多的是转化生长因子β(TGF-β),它可以通过各种作用促进瘢痕的增生挛缩,它的含量高低与瘢痕的增生程度直接成正比。而γ干扰素(γIFN)却是一种对瘢痕增生起到负性作用的细胞因子,和TGF-β的作用完全相反。本实验通过细胞培养的方法观察γIFN对瘢痕中TGF-β的影响,从而进一步证实其对瘢痕的抑制作用,并且寻找其存在这种作用时的合适浓度。 实验材料 本实验选用于我院行瘢痕整形手术的病人共10例,其中男8例,女2例,平均年龄为32岁。患者瘢痕为伤后半年到2年,均高于正常皮肤,质地坚硬,无充血红肿及破溃,瘢痕自形成后未均采取任何物理及化学治疗方法。术中将瘢痕切除后,将瘢痕组织保存于低温冰箱中(-80℃),待实验时应用。 实验方法 将瘤痕组织进行消毒处理后,消化掉其中的其它成分,仅保留其中的成纤维细胞进行原代培养,传一代后取相同数量的成纤维细胞再次进行培养,而此时培养液中含有浓度不同的YIF’N,浓度分别为OU/rnl,10U/nil,100U/ml以及1000U/Inl..用TGF-P试剂盒测出培养后的TGF个数值,并对各组间数值进行统计学分析,从中观察YIFN是否对TGF中存在抑制作用,同时寻找这种作用的合适浓度。 实验结果 在实验结束后,对各组间数值进行方差统计分析,可以发现,含YIFN10U/rnl与OU/Inl之间,并没有统计学差异,而100U/ml组,110U/M组与OU/ml组之间存在着明显统计学差异,而这两组数值间却不存在统计学差异。 讨 论 搬痕是皮肤不良修复以后的产物。搬痕增生挛缩的程度和许多因素有关,其中主要的是与胶原的代谢失衡有关。在增生性辍痕中,胶原合成明显增加,同时胶原酶含量减少,降解明显减慢。皿型胶原比例也有所上升。愿痕挛缩程度则与肌成纤维细胞数量的增加有着直接联系,另外,瘫痪的增生还与细胞外基质的变化有着密切的联系。TGF-6正是在这些方面对癫痕的增生挛缩起着重要的作用。首先,它可以促进成纤维细胞数量的增加,还可以使成纤维细胞分泌胶原的量增加,通过抑制胶原酶的作用来使胶原 ·2·降解速度减慢,从而对癫痕的增生起到明显的促进作用。其次,TGF今还可以诱导。平滑肌肌动蛋白在成纤维细胞中的表达,造成肌成纤维细胞数量明显增加,导致癫痕挛缩。最后,TGF-p还可以通过刺激成纤维细胞产生细胞外基质,延缓其更新速度,使胶原降解减慢。在增生性癫痕中,TGF中的含量都有明显增高,并且它的含量与摄痕的增生程度成正比。因此,TGF个对癫痕的增生挛缩起着非常重要的作用,如果在搬痕增生早期应用它的中和抗体或者降低活性TGF-p水平,将是治疗癫痕增生的关键。 YIFN是一种对癫痕起到抑制作用的细胞因子,它对成纤维细胞的分裂增殖以及胶原合成都有一定抑制作用,同时还能减少胶原沉积。YIFN同时能够减少癫痕组织中肌成纤维细胞的数量,从而减轻瘤痕挛缩。在过度增生的癫痕组织中,YIFN的含量偏低。由此可见,YIFN和TGF中对增生性癫痕有着几乎相反的作用。本实验正是基于这种原因,观察时 对TGF中的影响情况。 在本实验中,首先去处癫痕中的其它成分,仅保留成纤维细胞进行培养,传一代后,取基本等量的成纤维细胞再次进行培养,此时培养液中含有不同浓度的YIry,观察培养后的TGF个值。我们从实验结果可以看出,含有YIFN10U/Inl与OU/nd组方差统计分析后P>0·05,统计学上并无明显差异,而含有时fN 100*/d和10皿*nd组与0*d组相比,P<O.01,统计学上存在显著差异。而这两组间P>o.05,也没有统计学差异。由此我们可以看出,10oU/ml和ANOU/Inl的YIFN对增生性癫痕中TGF-p确实存在持抗作用,也正是由此对癫痕的增生挛缩起到抑制作用,而这两种浓度之间的持抗作用却没有差别,因此可以认为100U/rnl的时FN是这种作用的合适剂量。 ·3· 结 论 1.YIFN是一种可以有效抑制增生性癫痕中’h--’中表达的细胞因子,从而进一步证实其对癌痕增生以及挛缩的抑制作用。在治疗癫痕时可以起到明显的作用。 2.100U/InL浓度的YITh是这种抑制作用最有效的剂量,可以在最小毒性的作用下发挥其最大的治疗效果。
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