【摘 要】
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目的:探讨TAT-HOXB4蛋白与细胞因子组合扩增的人脐带血来源CD34阳性细胞,其在NOD/SCID多重免疫缺陷小鼠体内生理活性。方法:以GFP融合蛋白及西方墨点法检测公司所提供的TAT-H
【出 处】
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中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院
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目的:探讨TAT-HOXB4蛋白与细胞因子组合扩增的人脐带血来源CD34阳性细胞,其在NOD/SCID多重免疫缺陷小鼠体内生理活性。方法:以GFP融合蛋白及西方墨点法检测公司所提供的TAT-HOXB4蛋白进入细胞的能力;将新鲜的婴儿脐带血进行MNC分离,再用MiniMACS分离人脐带血CD34阳性细胞,以TAT-HOXB4蛋白作为人脐血CD34阳性细胞的扩增因子,以体外培养方式扩增人CD34阳性细胞、MNC细胞。收集扩增后的细胞,经流式细胞仪检测及显微镜下计数,对比扩增前后之单个核细胞、CD34阳性细胞数量;钴60照射NOD/SCID小鼠2.5Gy后,将扩增后人脐带血来源CD34阳性细胞以尾静脉注射方式殖入小鼠体内,评价扩增后细胞的活体内分化能力。结果:TAT-HOXB4蛋白能有效进入真核细胞细胞核内,并产生生物效应。以GFP融合HOXB4与293细胞共同培养后,用荧光显微镜观察,能观察到TAT-HOXB4-GFP有效进入细胞核中,以免疫印迹法检测经TAT-HOXB4培养后的细胞,同样可以在细胞核抽取部分检测到HOXB4蛋白条带存在,而未与HOXB4共同培养的细胞则无此条带,由上述两实验可证实TAT-HOXB4进入细胞能力良好。实验室先前试验已经得到HOXB4扩增细胞的最佳浓度与最佳处理条件。在此条件下CD34阳性细胞可被有效扩增,对比于对照组,实验组MNC数目增加3倍,CD34阳性细胞增加6倍。扩增后的细胞,经尾静脉注射人照射后的多重免疫缺陷小鼠NOD/SCID后,能分化成为淋系祖细胞及成熟细胞,证实其保有分化能力。结论:TAT-HOXB4蛋白具有进入真核细胞的生物活性,并且在进入细胞核后,有扩增造血细胞的活性,扩增后的细胞保有干细胞表面标志,且体内分化能力试验中证实,经TAT-HOXB4蛋白扩增的CD34阳性细胞,保有良好的分化能力。
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