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肺癌在恶性肿瘤的发病率及死亡率中均居首位,其中非小细胞肺癌占肺癌新发病例的80%-85%,约1/3肺癌患者确诊时已为局部晚期。传统化疗有效率及中位生存期并不尽如人意,且多数化疗药物在胃肠道及血液系统毒副反应非常大,常常是药物应用的剂量限制性毒副反应,其中有很大部分患者因此对化疗望而却步。肿瘤的发病机制极其复杂,不可能依赖单一药物或治疗方法而取得理想效果。因此,在不增加患者毒副反应的前提下,寻找能协同增加化疗效果、提高化疗有效率及延长患者生存期的药物成为肿瘤医生的研究热点。近年来,紫杉醇(PTX)被广泛应用于非小细胞肺癌的治疗,其抗癌机制为:紫杉醇可作用于细胞微管/微管蛋白,抑制微管解聚,使微管束的排列异常,导致纺锤体失去正常功能,促使细胞死亡。紫杉醇联合铂类是目前治疗非小细胞肺癌最常用的化疗方案之一。紫杉醇相比于顺铂等非小细胞肺癌的一线化疗药物,具有抗癌作用显著,副作用低的优点,得到了临床上的广泛应用。随着表观遗传调控剂抗肿瘤研究的深入,开展包括HDAC抑制剂在内的综合治疗方案的临床探索具有现实的意义,VPA便是这种新的、安全性高的HDAC抑制剂。丙戊酸钠(VPA)属于短链脂肪酸类HDAC抑制剂,国内外学者应用VPA对多种血液系统及实体恶性肿瘤进行基础研究,证实其有明显的抑制肿瘤的作用。丙戊酸钠与其他化疗药物相比,具有较低的毒性,且有良好的有效率。目的:探讨丙戊酸钠单药及联合紫杉醇是否能够增加肺癌A549细胞的凋亡及其可能相关机制,探索新的思路用于肺癌的治疗,为临床抗肺癌治疗提供理论依据。方法:1细胞来源:肺癌A549细胞由承德医学院基础研究所赠送2实验分组:设立空白对照组、紫杉醇组、丙戊酸钠组、紫杉醇与丙戊酸钠的联合用药组3mtt法检测丙戊酸钠对肺癌a549细胞增殖的影响4流式细胞仪检测各组a549细胞凋亡情况及对细胞周期的影响5荧光定量pcr法测定各组细胞bcl-2、bax及caspase3基因表达量的差异6westernblot法测定各组细胞bcl-2、bax及caspase3蛋白表达的差异7数据统计分析:每个实验至少重复三次,统计数据使用spss19.0统计软件,分别用均数±标准差(x±s)的数据进行表示。多组之间的比较使用单因素方差分析法,两组之间的比较使用lsd法,p<0.05则表示差异有统计学意义。结果:1mtt法检测丙戊酸钠对肺癌a549细胞增殖的影响:先筛查出各药物作用细胞24h的ic20,分别为:丙戊酸钠为5.80mmol/l、紫杉醇为0.05μg/ml,并以此作为后续实验各干预组的药物浓度。mtt法检测不同浓度的丙戊酸钠作用于a549细胞24h、48h及72h后的抑制率,结果示,同一作用时间,随着丙戊酸钠浓度的升高,抑制率也逐渐升高,差异均有统计学意义(p<0.05);同一丙戊酸钠浓度,随着作用时间的延长,抑制率也逐渐升高,差异具有统计学意义(p<0.05),说明丙戊酸钠对肺癌a549细胞增殖具有抑制作用,且呈剂量依懒性及时间依赖性。2流式细胞仪检测丙戊酸钠联合紫杉醇对肺癌a549细胞凋亡及细胞周期的影响:实验分4组,空白对照组、紫杉醇组(0.05μg/ml)、丙戊酸钠组(5.80mmol/l)、联合用药组(ptx0.05μg/ml+vpa5.80mmol/l),各组药物作用24h后,流式细胞仪检测证实丙戊酸钠与紫杉醇有联合促肺癌细胞凋亡的作用,4个组的总凋亡率呈上升趋势,且联合用药组的总凋亡率最高,差异具有统计学意义(p<0.05)。与空白对照组相比,紫杉醇组g2/m期细胞比例明显增多,丙戊酸钠g0/g1期细胞比例明显增多(p<0.05),联合用药组的细胞在g0/g1期百分比明显增加,且较丙戊酸钠组更为明显(p<0.05),差异具有统计学意义3荧光定量pcr及westernblot法检测两药联合对肺癌a549细胞中bcl-2、bax及caspase3基因及其蛋白表达的影响:实验分组同上,药物作用24h后,与空白对照组比较,各用药组A549细胞中Bcl-2基因及蛋白的表达均降低,且联合用药组的表达最低,各用药组A549细胞中Bax及Caspase3基因及蛋白的表达均升高,且联合用药组的表达最高(P<0.05,各组差异有统计学意义)。表明随着药物的联合作用,Bcl-2的表达逐渐降低,Bax及Caspase3的表达逐渐升高结论:丙戊酸钠能够抑制A549细胞的增殖,且呈现剂量依懒性及时间依赖性,能够将A549细胞生长阻滞在G0/G1期,且丙戊酸钠与紫杉醇联合应用,对于抑制肺癌细胞的增殖具有协同作用。其机制可能与其能够上调A549细胞中凋亡因子Bax及Caspase3的表达,下调A549细胞中Bcl-2的表达有关。