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谷胱甘肽是一种包含巯基的三肽化合物,广泛存在于动植物和微生物体内,在细胞的氧化还原反应中发挥着重要作用。生物体内的谷胱甘肽以还原型和氧化型两种形式存在,二者的含量及比值可以作为氧化应激和疾病诊断的重要标识物。已有文献报道还原型谷胱甘肽含量的降低与一些疾病的发生有关,如糖尿病、癌症、心血管疾病等。因此,开发一种简单、快速的谷胱甘肽检测方法,对了解细胞的生理活动和疾病的变化,具有十分重要的意义。
本文以实验室自行设计的微流控芯片为技术平台,以化学修饰铂丝微电极为工作电极,采用微芯片电泳-电化学检测方法实现了GSH和GSSG的同时分离和检测。最后选择肝癌细胞和肺癌细胞作为实验模型,对细胞内两种物质的含量变化进行研究。论文将从以下五个章节进行详细讨论:
第一章文献综述
首先对谷胱甘肽的生物学功能及其检测方法进行了概述,指出了研究谷胱甘肽的重要性;然后对微流控芯片的材料、控制方式、分离方式和检测系统进行了详细的综述,分析了目前谷胱甘肽检测手段存在的难点与不足,提出本论文选题的背景和主要研究内容。
第二章电极修饰
采用化学修饰法对铂丝微电极进行修饰,分别得到CoHCF/Pt,nanosized-CoHCF/Pt和Cu-Sn-Cr/Pt修饰电极,采用CV和i-t法研究了谷胱甘肽在3种电极上的电化学行为,并对3种电极对谷胱甘肽的催化效果进行比较,选择最佳电极修饰条件。
第三章GSH和GSSG分离检测条件优化
研究了缓冲液pH、缓冲液浓度、SDS浓度、进样时间、分离电压和检测电位等因素对GSH和GSSG分离检测的影响,并对其影响原因进行初步探讨,在最佳实验条件下,GSH和GSSG在一定范围内呈良好线性,最低检测限分别达到了4.87μM和1.98μM,且在优化条件下电极稳定性良好。
第四章采用微芯片电泳-电化学检测方法研究对乙酰氨基酚对肝癌细胞中谷胱甘肽含量的影响
在现有实验条件下,测定了GSH和GSSG的回收率。采用MTT实验研究了对乙酰氨基酚对肝癌细胞活性的影响,选择合适浓度的对乙酰氨基酚作用细胞,研究不同浓度药物对细胞内GSH和GSSG含量的影响。
第五章采用微芯片电泳-电化学检测方法研究PM2.5对肺癌细胞中谷胱甘肽含量的影响
研究不同浓度PM2.5对肺癌细胞内GSH和GSSG含量的影响,结果表明一定浓度的PM2.5能使GSH和含量升高。