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目的:在原发性肝癌病例中,肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的发生率较高,HCC的进展涉及多因素病因和多基因交替的过程。许多研究表明跨膜蛋白对恶性肿瘤的迁移侵袭等恶性行为有影响。跨膜蛋白206（Transmembrane protein 206,TMEM206）属于跨膜蛋白家族成员,但TMEM206在肝细胞癌中是否发挥作用,发挥何种作用尚未见研究。因此,本实验旨在探究TMEM206在肝癌组织和细胞中的表达情况,从细胞和分子水平上探究其对肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭等多种肿瘤恶性行为的影响。方法:1.通过肿瘤基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库,下载肝细胞癌病人临床数据。通过人类蛋白质图谱（The Human Protein Atlas,THPA）在线工具,下载肝细胞癌组织及癌旁组织的免疫组化染色图。评估TMEM206在肝细胞癌组织及癌旁组织中的表达情况,分析临床病理特征,进行单因素和多因素Cox回归分析评估TMEM206是否可以作为潜在生物标志物,绘制生存曲线评估TMEM206对肝细胞癌患者预后的影响,通过GSEA（Gene Set Enrichment Analysis）通路富集分析找出TMEM206作用的相关通路。2.通过实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测正常肝细胞及肝癌细胞中TMEM206基因及蛋白的表达。通过慢病毒转染肝癌细胞构建TMEM206慢病毒敲低模型,通过荧光观察转染情况,并检测细胞中TMEM206基因及蛋白表达变化情况,确保TMEM206慢病毒敲低模型构建的成功。3.利用细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit-8,CCK-8）及平板克隆形成实验,在细胞表型水平上,检测TMEM206对肝细胞癌细胞增殖能力的影响。利用划痕实验和Transwell迁移及侵袭实验,检测TMEM206对肝细胞癌细胞迁移侵袭能力的影响。在分子水平上,分别采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验,检测细胞迁移侵袭相关基因,基质金属蛋白酶（matrix-metalloproteinase,MMP）2和9、钙粘连耦合蛋白（cadherin,CAD）E和N的表达水平,在转录和翻译阶段验证TMEM206对肝细胞癌迁移侵袭能力的影响。4.利用免疫荧光法检测TMEM206对肝癌细胞中PI3K和AKT磷酸化表达情况的影响,并采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测PI3K和AKT及其磷酸化表达情况,验证TMEM206对肝癌细胞中PI3K/AKT通路的影响。结果:1.从TCGA-STAD数据库中下载374例肝细胞癌组织和50例肝细胞癌旁正常组织,共424例样本进行分析。利用THPA在线工具,下载肝细胞癌患者的免疫组化染色图,包括肝细胞癌组织及癌旁组织。结果均表明,TMEM206在肝细胞癌组织中显著过表达。对样本进行临床病理特征分析发现,TMEM206表达与HCC患者的年龄和性别均无关,且与肝细胞癌的分级分期有显著相关。单因素Cox回归分析和多因素Cox回归分析均表明,TMEM206可作为肝细胞癌患者的潜在生物标志物。GSEA通路富集分析结果表明,TMEM206与癌症通路相关。2.在细胞水平上,通过检测人正常肝细胞系HL-7702和三种人肝癌细胞系Hep G2、SMMC-7721和Bel-7402中TMEM206 m RNA及蛋白的表达情况,结果显示,三种肝癌细胞系中TMEM206的表达水平均高于正常肝细胞系。其中,Hep G2细胞系中TMEM206的表达最高。3.慢病毒转染并筛选稳定细胞株后,通过荧光显微镜观察绿色荧光表达情况,初步判断慢病毒转染效率。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测结果表明,实验组Hep G2细胞系中TMEM206表达被显著敲低,TMEM206敲低细胞模型构建成功。4.CCK-8增殖实验及平板克隆形成实验结果均表明,TMEM206的敲低能显著抑制HCC细胞Hep G2的增殖和克隆形成。划痕实验和Transwell迁移及侵袭实验结果表明,TMEM206的敲低能显著抑制HCC细胞Hep G2的迁移和侵袭能力。同时,分子水平上检测MMP2和N-CAD表达水平降低,E-CAD表达水平升高,均表明TMEM206的敲低抑制了Hep G2的迁移和侵袭。5.免疫荧光法结果显示,TMEM206的敲低显著抑制了HCC细胞Hep G2的p-PI3K和p-AKT的表达,同时在实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验也显示相同结果。结论:在肝细胞癌中,TMEM206显著高表达,并且与肝细胞癌患者的不良预后显著相关,是肝细胞癌潜在的生物标志物。TMEM206可能作用于PI3K/AKT通路,促进HCC细胞的增殖、迁移和侵袭。