论文部分内容阅读
粉红螺旋聚孢霉(Clonostachys rosea)是一类广泛存在于土壤中的菌寄生真菌,可以防治多种植物真菌病害,具有良好的生防潜力。本研究从前期构建的67-1菌株寄生核盘菌的转录组中挑选出6个差异表达基因,钠离子ATP酶基因crena、异核体不亲和蛋白基因crhip、乙醇胺利用蛋白基因creut和creutq、短链脱氢酶基因crsdr以及一个新基因Unigene 494,q RT-PCR验证表明,上述基因在菌核诱导期间均显著上调表达。从67-1全基因组获得基因全长,生物信息学分析表明,crena cDNA长度为3750 bp,开放阅读框(ORF)长1419 bp,编码472个氨基酸,与顶头孢霉(Acremonium chrysogenum)钠离子ATP酶相似性为73.8%。通过基因敲除与回补的方法获得了该基因的敲除与回补突变株,敲除突变菌株?crena在PDA培养基上生长速率和产孢能力显著低于野生菌株与回补菌株(P<0.05);?crena对菌核的寄生能力由4级降为2级,对立枯丝核菌与尖孢镰刀菌的寄生能力显著下降,回补菌株与野生菌株没有显著差异;?crena对黄瓜枯萎病的防效下降了48.5%。上述结果表明crena参与了粉红螺旋聚孢霉67-1寄生核盘菌过程。crhip cDNA全长2436 bp,开放阅读框(ORF)长1794 bp,编码597个氨基酸,与环状刺盘孢霉(Colletotrichum orbicular)异核体不亲和性蛋白相似性为43.1%。通过基因敲除与回补的方法获得了该基因的敲除与回补突变株,敲除突变菌株?crhip在PDA培养基上生长速率显著低于野生菌株与回补菌株(P<0.05);?crhip对菌核的寄生能力由4级降为3级,回补菌株与野生菌株没有显著差异;?crhip对尖孢镰刀菌的寄生能力显著下降,对黄瓜枯萎病的防效下降了24.5%。上述结果表明crhip参与了粉红螺旋聚孢霉的67-1寄生核盘菌的过程。creut cDNA全长373 bp,开放阅读框(ORF)长363 bp,编码120个氨基酸,与炭疽病菌(Colletotrichum incanum)乙醇胺利用蛋白相似性为81%。通过基因敲除的方法获得了该基因的敲除突变株,与野生菌株相比,敲除突变与野生菌株相比,?creut在PDA培养基上生长速率和产孢水平无显著差异;?creut对菌核的的寄生能力由4级降为2-3级;同时对立枯丝核菌菌的寄生能力显著下降。显微观察发现,野生菌株菌丝能够穿透、缠绕、附着立枯丝核菌菌丝,但突变株菌丝没有发现明显的寄生现象;对黄瓜枯萎病的防效降低了41%。上述结果表明creut参与了粉红螺旋聚孢霉67-1寄生核盘菌的过程。crsdr cDNA长度为911bp,开放阅读框(ORF)长495 bp,编码164个氨基酸,与胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeos porioides)短链脱氢酶具有56.1%的相似性。通过基因敲除的方法获得了该基因的敲除突变株,与野生菌株相比,?crsdr在PDA培养基上生长速率与产孢能力显著下降(P<0.05);?crsdr对菌核的寄生能力由4级降为3级;对尖孢镰刀菌与立枯丝核菌的寄生能力显著下降;对黄瓜枯萎病的防效下降了42.4%。上述结果表明creut参与了粉红螺旋聚孢霉67-1寄生核盘菌的过程。