基于cDNA-aflp筛选茶树被茶尺蠖取食诱导的相关差异基因及SAMT的克隆与表达分析

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:collinccs
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
茶树虫害一直是我国茶叶高产和优质的重要限制因子之一,而且茶树被害虫取食后所诱发的防御反应分子机制至今不清,研究尚处于起步阶段。本研究通过cDNA-AFLP技术筛选茶树叶片被茶尺蠖取食后差异表达基因的数量和种类,并运用qRT-PCR对相关差异基因进行验证和表达规律分析,同时对茶树SAMT进行cDNA全长克隆、原核表达及其被茶尺蠖取食诱导后、MeJA处理诱导后的表达特征分析。主要结果如下:   (1)利用cDNA-AFLP技术分析茶树被茶尺蠖取食诱导前后的基因表达谱差异,试验共挑取231条表达差异条带(TDF),通过验证、测序后获得134条(>80bp)EST序列,占挑取条带总数的58%,且序列长度在80-700bp之间。其中,上调与下调TDF数分别为81和53条,各占获得EST序列的60.4%与39.6%。   (2)在GenBank中进行Blastx比对分析表明,获得的TDF序列在已知功能上主要与基础代谢相关,占总数的23.1%,其次与光合与能量,以及蛋白质合成与储藏相关,分别占9.0%与8.2%,再者是与信号传导相关,占6.7%,与抗病与防御相关的占4.5%,其它分别与转录因子、运输、细胞生长与结构相关的占1.5-3.0%;此外,还有6.7%的序列功能不明确,20.2%的没有同源序列。这些序列已经递交到GenBank中,其登录号为JK711037-JK711046、JK714343-JK714436和JK720971-JK721000。   (3)qRT-PCR分析表明,茶树被茶尺蠖取食后3h,与p450(21F1)、乙烯响应因子(22D)、热激蛋白(27L3)和MYB转录因子(28F)相关的TDF表达量皆大幅度上升,其中28F上升幅度最大,为对照的336.2倍,其次为22D,随后依次为21F1和27L3;取食后6h均急剧降低,至48h时,除了27L3略高于对照外,其余都低于对照。   (4)以差异片段26N序列为基础,利用3’/5’-RACE技术从茶树叶片中克隆了一条编码SAMT的cDNA全长,其长度为1542bp,开放阅读框(ORF)1098bp,编码365个氨基酸,并命名为CsSAMT(GenBank登录号:JQ406919),其编码的SAMT理论分子量和等电点分别为41.7kD与5.39;同源比对发现其与金鱼草的AmSAMT同源性最高,为53%,属于甲基转移酶-7超家族,具有SABATH甲基转移酶类的共有性质;蛋白质保守功能结构域预测分析表明,CsSA:MT含有甲基转移酶-7超家族基因相应保守区,如一个保守的SAM的结合位点结构域I[(V/I/L)(L/V)(D/E)(V/I)G(G/C)G(T/P)G],一个SA结合位点结构域[SSYSVHWLS]等。   (5)原核表达结果表明,CsSAMT表达的融合蛋白主要分布于包涵体中,分子量约为59kDa;经过温度和IPTG浓度条件进行优化,以及表达载体的更换后,CsSAMT表达的融合蛋白仍然分布于包涵体中,且没有测出其酶活性。   (6)茶树被茶尺蠖取食后3h,CsSAMT的表达量迅速上升至对照的1.7倍,但是12h后一直处于下调状态,表达量为对照的30-62%;经外源MeJA处理后6h之内,CsSAMT的表达量略有减低,但是9h时,表达量迅速上升至对照的3.0倍,随后表达量一直处于降低状态。
其他文献
龙眼(Dimocarpus longan Lour.)是我国著名热带亚热带特色果树。然而,龙眼果实存在种子大、可食率低,胚胎败育可导致落果、结实率降低等问题,影响龙眼的品质和产量。龙眼体胚发生
由浙江大学教学仪器中试厂生产的鸣泉牌教学录音机,结构精巧,使用方便,在中小学校教学中广泛使用。下面说说该机的常见故障及检修方法。一、不能放音,电源指示灯不亮。出现
Orostachysjaponicus is an herb that contains several functional components and has traditionally been used to treat various diseases in Asia.In this study,bioac
Drug resistance greatly limits docetaxel efficiency in the treatment of non-small cell lung cancer (NSCLC).Dickkopf 4 (DKK4),a negative regulator of Wnt/β-cate
介绍了ISDN BRA接口,对其信号及其传输特性进行了论述,分析了交换杌与NT之间的连接。 Introduces the ISDN BRA interface, discusses its signal and its transmission cha
以职业能力作为专业建设的导向是目前很多高校在人才培养过程中的普遍做法,通过对行业的深入调研了解行业的岗位设置,根据岗位工作内容细化职业能力需求,再按照职业能力的培
跨文化交际能力是涉外旅游业从业人员必备的素质.高校旅游类专业的旅游英语课程的目标之一是培养未来的旅游从业人员的跨文化交际能力.本文分析了在旅游英语课堂上,学生文化