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背景与目的：自噬(autophagy)是细胞利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程，是真核细胞特有的生命现象，对于细胞清除废物、重建结构以及生长发育、维持内环境稳定起到重要的作用，并且与多种疾病的发生密切相关。Beclin1基因与酵母自噬基因Atg6同源，是调控自噬的重要基因。它主要通过PI3K途径与其他自噬相关蛋白形成复合体，并介导其他自噬蛋白定位于前自噬小体，参与调控哺乳动物自噬体的形成。最新的研究表明，Beclin1基因不仅是参与自噬体形成过程的关键因子，而且与肿瘤等多种疾病的发生有密切关联。Beclin1基因在人类组织中分布广泛，在不同的组织细胞中均能够检测到其表达。目前发现有多种肿瘤细胞存在Beclin1等自噬基因的缺陷，因此导致肿瘤细胞能够逃避自噬性死亡。而稳定转染Beclin1后促进了细胞的自噬活性，同时降低了其成瘤能力。另外，某些抗肿瘤药物也有可能通过自噬机制在肿瘤治疗方面发挥作用。总之，Beclin1与肿瘤发生之间存在着复杂的联系，但其具体机制仍不十分明确。胰腺癌是消化系统常见的恶性肿瘤，因其进展快，死亡率高等特点也被认为是预后最差的恶性肿瘤之一。手术及放、化疗等治疗方式疗效均不理想。随着分子生物学的进展，目前通过自噬途径干预正在成为肿瘤治疗研究中新的切入点，有关肿瘤细胞的生物学效应和分子机制的研究将为治疗胰腺癌提供新的希望，具有光明的前景和重要的临床意义。基于上述，本研究将以人胰腺癌细胞系Miapaca2作为研究对象，通过基因转移技术将构建的Beclin1的干扰序列siRNA转导入人胰腺癌细胞系Miapaca2中，采用CCK-8、免疫印记、RT-PCR以及流式细胞仪分析等多种方法，在体外细胞培养实验中观察Beclin1-siRNA对Miapaca2细胞的增殖、细胞周期和凋亡的影响，以及低表达Beclin1的胰腺癌细胞Miapaca2对化疗药物吉西他滨作用的敏感性，并初步探讨其可能的分子机制。方法：1.利用脂质体法将Beclin1-siRNA转染至人胰腺癌细胞系Miapaca2中，实时荧光定量PCR以及Western Blot方法鉴定转染后Beclin1的表达受抑制的情况。2.CCK-8法检测Beclin1-siRNA对胰腺癌细胞Miapaca2增殖活性的影响。3.流式细胞仪分析Beclin1-siRNA对胰腺癌细胞Miapaca2凋亡及细胞周期分布的影响。4.流式细胞仪分析化疗药物吉西他滨作用于低表达Beclin1Miapaca2细胞引起细胞周期分布及凋亡的变化。结果：1.利用脂质体转染技术将Beclin1-siRNA转染至人胰腺癌细胞系Miapaca2中，经实时荧光定量PCR及Western Blot方法检测证实，Beclin1-siRNA可以引起Beclin1表达的下调并可以维持稳定低表达。2.经CCK-8方法检测证实，Beclin1-siRNA转染人胰腺癌细胞系Miapaca2后对细胞增殖活性无明显影响。3.经流式细胞仪分析，Beclin1-siRNA缩短了胰腺癌细胞Miapaca2的G2期和S期，改变了胰腺癌细胞Miapaca2的细胞周期分布，而对细胞凋亡没有明显影响。4.化疗药物吉西他滨作用于低表达Beclin1的Miapaca2细胞，对细胞周期分布及凋亡均产生明显的作用。结论：Beclin1-siRNA转导入人胰腺癌细胞系Miapaca2可使Beclin1的表达下调并稳定低表达；对Miapaca2细胞的增殖活性及凋亡无明显影响；改变了Miapaca2细胞的周期分布，即G2期和S期均明显缩短；化疗药物吉西他滨作用于低表达Beclin1的Miapaca2细胞，细胞凋亡明显受到抑制，即Beclin1-siRNA降低了吉西他滨药物诱导的细胞凋亡；同时改变了细胞周期分布，G1、G2期延长，S期明显缩短。可见，Beclin1不仅是调控胰腺癌细胞自噬的重要因子，也参与了肿瘤细胞周期分布与凋亡的过程，并影响了化疗药物吉西他滨对胰腺癌细胞的杀伤作用。其中的重要发现与以往的Beclin1作为肿瘤细胞自噬的正性调控因子的经典理论相悖，但是对设立新的胰腺癌治疗策略却具有原创的理论意义。