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目的：采用在体和离体研究的技术手段，观察不同年龄阶段小鼠神经干细胞(NeuralStemCells,NSCs)衰老标志物及其增殖潜能的变化，揭示NSCs衰老进程。并在此研究基础上深入探讨20S蛋白酶体及其核心亚单位PSMB1和PSMB5在NSCs衰老进程中的调控作用，明确20S蛋白酶体活性改变对NSCs增殖能力的影响，揭示NSCs衰老机理，以期为恢复干细胞活力提供新思路。方法：选取胚胎（Embryonicdays14,E14）、新生（Postnatalday0，P0）、成年（Postnataldays90，P90）、老年（Postnataldays540，P540）小鼠作为研究对象。1.采用SA-β-gal（senescence-associatedβ-galactosidase）染色法观察不同年龄小鼠脑内衰老细胞数量，判定脑老化程度；同时腹腔注射BrdU，通过BrdU标记实验检测不同年龄小鼠室管膜下区（Subventricularzone,SVZ）NSCs增殖潜能。2.体外分离培养源自不同年龄小鼠NSCs，采用BrdU掺入实验和SA-β-gal染色法，通过离体实验进一步观察不同年龄NSCs增殖能力及衰老标志物的表达变化。3.应用20S/nestin免疫荧光双标，检测20S蛋白酶体在NSCs的表达。4.应用荧光分光光度法检测源自不同年龄阶段NSCs20S蛋白酶体活性。5.提取源自不同年龄小鼠NSCs总RNA，采用SYBRGreenReal-timePCR方法在基因水平定量分析20S蛋白酶体核心亚单位PSMB1和PSMB5的表达变化。6.应用蛋白酶体抑制剂MG132作用于体外培养NSCs，通过BrdU掺入实验和CCK-8法检测不同浓度MG132对NSCs增殖潜能的影响。结果：1.SA-β-gal染色结果显示，P90和P540小鼠SVZ脑区周围可见大量胞浆呈蓝色着色的SA-β-gal阳性衰老细胞，而E14和P0小鼠SVZ脑区周围仅偶见个别SA-β-gal阳性衰老细胞，提示随年龄增加脑内SA-β-gal活性增强，衰老细胞逐渐增多。伴随SA-β-gal活性上调，P90和P540小鼠SVZBrdU+细胞急剧减少，分别较E14小鼠减少92%和95%，BrdU+细胞散在分布于P90和P540小鼠侧脑室背外侧角和外侧壁，表明成年期和老年期NSCs增殖潜能降低。2.体外分离培养源自不同年龄小鼠NSCs，P90和P540小鼠神经球形成周期较E14和P0延长，BrdU阳性率分别为4.1%±0.4%和8.4%±0.9%（p<0.01），较E14（38.0%±2.0%，p<0.01）和P0（20.8%±1.24%，p<0.01）显著降低；SA-β-gal染色结果显示P90与P540阳性衰老细胞明显增多，SA-β-gal阳性率分别为26.0%±0.8%和27.6%±1.2%（p<0.01），此体外研究结果进一步表明成年期后NSCs增殖能力降低，NSCs出现老化现象。3.20S/nestin免疫荧光染色结果显示NSCs表达20S蛋白酶体，20S蛋白酶体分布于NSCs细胞浆和细胞核。4.荧光分光光度法检测源自不同年龄阶段小鼠NSCs20S蛋白酶体活性，结果显示P90组NSCs20S蛋白酶体活性为E14组0.8±0.2倍（p<0.01），P540组NSCs20S蛋白酶体活性为E14组0.6±0.1倍（p<0.001），提示成年期及老年期NSCs20S蛋白酶体活性下调。5.Real-timePCR定量分析不同年龄阶段NSCs20S蛋白酶体核心亚单位PSMB1和PSMB5mRNA表达变化，其中P90组PSMB1mRNA表达水平为E14组35%±1%（p<0.001），PSMB5mRNA表达水平为E14组41%±1%（p<0.001）；P540组PSMB1mRNA表达水平为E14组34%±8%（p<0.001），PSMB5mRNA表达水平为E14组66%±1%（p<0.001），提示成年期和老年期20S蛋白酶体核心亚单位PSMB1和PSMB5mRNA表达水平下调。6.应用蛋白酶体抑制剂MG132作用于体外培养NSCs5h，BrdU掺入实验结果显示0.8μMMG132能够显著抑制NSCs增殖能力，其BrdU阳性率较DMSO溶剂对照组减少22.7%（p<0.05），并且此抑制作用呈现剂量依赖性；CCK-8检测结果进一步表明随MG132浓度增加NSCs细胞活力逐步降低，20μMMG132能够使NSCs增殖能力降低44%（p<0.05），提示蛋白酶体活性下调可能是导致NSCs衰老进程中细胞增殖潜能降低的重要因素。结论：1.随年龄增加NSCs增殖潜能降低，衰老标志物表达水平上调，NSCs出现老化现象。2成年和老年NSCs，20S蛋白酶体活性及其核心亚单位PMSB1和PMSB5mRNA表达水平下降，提示蛋白酶体与NSCs衰老进程密切相关。3.抑制蛋白酶体活性能够显著降低NSCs增殖能力，提示蛋白酶体参与NSCs功能维持