论文部分内容阅读
[目的]姜黄素是一种天然提取的植物多酚，广泛应用于食品、药物和化妆品中。就像一些熟知的抗氧化剂一样，姜黄素也可能发挥“双刃剑”作用——尽管姜黄素通常表现抗氧化性，但在特定的条件下，它也会表现出促氧化特性。本文用体外实验研究姜黄素诱导的DNA损伤和细胞凋亡及其作用条件、剂量-反应关系和时间-效应关系，初步探讨其可能的作用机制。
[方法]
(1)姜黄素诱导细胞DNA损伤：采用单细胞凝胶电泳方法，结合细胞活性测定方法，检测0～100μmol／L姜黄素在有或无100μmol／LCu2+存在的条件下，分别作用于CHL细胞和SMMC7721细胞2h后，造成的DNA损伤及其继续培养2h后的修复情况。
(2)姜黄素诱导细胞凋亡与氧化应激水平的关系：姜黄素作用于CHL细胞，显微镜下观察细胞形态变化；流式细胞仪计数分析细胞周期时相及凋亡率；用吖啶橙／溴化乙啶双染色法测定细胞的凋亡率和膜受损率；流式细胞仪测定细胞内产生的活性氧。
(3)姜黄素诱导质粒pBR322DNA氧化损伤：在不同浓度Cu2+(0～200μmol／L)或抑制剂(过氧化氢酶、硫脲、叠氮化钠及浴铜灵磺酸)存在条件下，姜黄素与质粒pBR322DNA于37℃反应0～4h；经琼脂糖凝胶电泳后，扫描采集电泳图像，测定质粒DNA各种构型的光密度值，计算超螺旋型DNA所占的百分比(SC％)。
[结论]
(1)SMMC7721细胞对姜黄素诱导的DNA损伤作用的敏感性高于CHL细胞；当细胞存活率＜80％时，细胞的DNA损伤不可修复，可能是由姜黄素的细胞毒性作用造成的。
(2)在100μmol／LCu2+存在的条件下，姜黄素的形态发生改变；干扰了CHL细胞周期的正常信号传导，使细胞周期停滞在S期，减少分裂期细胞，导致细胞增殖受到抑制；同时，诱导产生大量ROS，引起CHL细胞氧化应激，导致细胞凋亡。
(3)姜黄素在≥100μmol／LCu2+催化下，可引起质粒pBR322DNA的氧化损伤，并具有一定的剂量．反应关系和时间-效应关系。
本次研究条件下，所得的结果提示：姜黄素在≥100μmol／LCu2+存在的条件下，表现出促氧化剂的特性，产生过量的活性氧，从而诱导DNA氧化损伤并启动细胞凋亡。