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番茄是世界上最重要的蔬菜作物之一,仅中国的种植面积就达85万公顷以上,经济价值显著。然而近年来以番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus, TYLCV)为主的病毒病在中国各地迅速扩展,危害严重。培育抗病品种是防治该病最为有效途径之一。因此,本研究拟采用]RNAi技术,通过克隆目的基因,构建嵌合基因载体,并转化至黄化曲叶病敏感型番茄(上海合作908)植株中,通过抗性鉴定筛选出高抗TYLCV的番茄新材料。研究结果如下：(1)克隆AV1、AC1和AC3作为目的基因,通过序列同源性分析,确定其保守序列AV1片段151bp(893bp-1044bp), AC1片段150bp(1710bp-1860bp), AC3片段153bp(1054bp-1207bp)并以正反方向连接到干扰载体pBIN19中,构建了3个单基因片段的RNAi载体PBIN19-AV1 (i/r)、pBIN19-AC1 (i/r)、pBIN19-AC3 (i/r);利用重叠延伸PCR法,对3个基因片段桥连拼接成嵌合基因AV1-AC1-AC3,并以正反方向连接到干扰载体pBIN19中,成功构建嵌合基因]RNAi载体pBIN19-AV1-AC1-AC3 (i/r).(2)通过构建番茄PDS基因RNAi载体pBIN19-PDS (i/r),并转化到农杆菌EHA1 05中,工程农杆菌侵染2-3叶期的番茄幼苗。结果显示,侵染后的番茄叶片出现白化症状,而且系统性分布在后续生长的真叶上,表明RNAi载体瞬时表达体系在番茄上可行。利用含RNAi载体pBIN19-AV1(i/r)、pBIN19-AC1 (i/r)、pBIN19-AC3 (i/r)和pBIN19-AVl-ACl-AC3 (i/r)的农杆菌侵染番茄,结果显示,4种RNAi载体均能产生抗病性效果,其中以瞬转嵌合AV1-AC1-AC3基因片段的抗病能力最强,5周内,抗病率达到100%。(3)建立并优化了番茄的再生体系和遗传转化体系。结果表明：子叶和下胚轴均可作为番茄遗传转化的外植体,两者的愈伤诱导率和不定芽的诱导率相似。其中子叶阳性芽诱导最适的培养基为MS+0.5 mg/L IAA+0.5 mg/L BAP,而下胚轴则为MS+0.5 mg/L IAA+2.0 mg/L BAP;最适生根的培养基为MS+0.1 mg/L IAA;最适子叶的转化条件为浓度为OD600=1.0的农杆菌侵染10 min后暗培养2d(不定芽诱导率为39%),而下胚轴为同等浓度的农杆菌侵染30 min后暗培养2d(不定芽诱导率为40%)。(4)通过T0代植株的抗病毒性分析可知,转多基因的TO代植株的抗病能力要优于转单基因T0代植株。