论文部分内容阅读
目的:观察慢性氟中毒时仔鼠海马组织中氧化应激、兴奋性神经递质特异性NMDA受体亚单位(NR1、NR2A、NR2B)及其磷酸化蛋白水平变化,以及NMDA受体拮抗剂MK-801的拮抗作用。方法:建立体外饮水型氟中毒仔鼠模型,共分为6组:(1)对照组(饮用自来水,含氟量<0.5mg/L);(2)低氟组(含氟量:10 mg/L);(3)高氟组(含氟量:100 mg/L);(4)拮抗组(MK-801:1.0 mg/kg);(5)低氟拮抗组(含氟量:10 mg/L、MK-801:1.0 mg/kg);(6)高氟拮抗组(含氟量:100 mg/L、MK-801:1.0 mg/kg)。仔鼠出生后,观察其生长发育和神经行为发育情况;PND28天,Morris水迷宫检测仔鼠学习记忆能力;HE染色和尼氏染色观察仔鼠脑组织形态学改变;NO及NOS合成酶试剂盒检测仔鼠血清氧化应激水平;Western blot检测仔鼠海马组织中NMDA受体各亚单位(NR1、NR2A、NR2B)及其磷酸化蛋白的改变。结果:与对照组比较,低氟组和高氟组PND1、PND7、PND14体重无显著变化(P>0.05);PND21,与对照组比较,高氟组仔鼠体质量有所下降(P<0.05);PND28,与低氟组和对照组比较,高氟组仔鼠体质量增长速度缓慢(P<0.05);与对照组比较,高氟组和低氟组的脑质量显著减轻(P<0.05);而各组脑脏器指数之间无明显差异(P>0.05)。与对照组比较,高氟组睁眼时间有所延长(P<0.05);各组仔鼠张耳、牙齿萌出、长毛时间无显著差异(P>0.05)。与对照组和低氟组比较,高氟组仔鼠完成悬崖回避时间有所延长(P<0.05);此外,高氟组完成平面翻正的时间与对照组比较有所延长(P<0.05);各组完成听觉惊愕、触须定位的达标时间无显著差异(P>0.05)。Morris水迷宫结果显示,与对照组比较,高氟组和低氟组仔鼠逃避潜伏期增加,在目标象限停留时间缩短,穿越平台次数减少(P<0.05);与低氟组比较,高氟组逃避潜伏期延长,在目标象限停留时间缩短,穿越平台次数减少(P<0.05)。加入MK-801处理后,与高氟组比较,高氟拮抗组仔鼠穿越平台次数显著增加,第一次穿越平台时间缩短,目标象限停留时间增加(P<0.05)。HE染色显示,高氟组CA1区胞质嗜碱性略增加,CA3区神经细胞排列略为紊乱,嗜碱性增加,部分细胞核固缩。加入MK-801处理后,拮抗组仔鼠神经元CA1区及CA3区神经元受损;低氟拮抗组和高氟拮抗组神经元形态学有所改善。尼氏染色显示,在CA1区,与对照组比较,低氟组和高氟组仔鼠海马尼氏体数量减少(P<0.05);其中,与低氟组比较,高氟组仔鼠海马尼氏体数量减少(P<0.05);加入MK-801处理后,与高氟组比较,高氟拮抗组仔鼠尼氏体数量增加(P<0.05)。在CA3区,与对照组比较,低氟组和高氟组仔鼠海马尼氏体数量减少(P<0.05);加入MK-801处理后,与高氟组比较,高氟组仔鼠海马尼氏体数量有所增加(P<0.05)。氧化应激水平检测高氟组仔鼠血清NO含量增加(P<0.05);MK-801拮抗处理后,与高氟组比较,高氟拮抗组NO含量有所减少(P<0.05)。与对照组比较,高氟组和低氟组血清NOS、i NOS活力增强;与低氟组比较,高氟组血清NOS、i NOS活力增加;加入MK-801拮抗处理后,高氟拮抗组仔鼠血清NOS、i NO活力下降(P<0.05);此外,与拮抗组比较,高氟拮抗组仔鼠血清i NOS活力显著增强(P<0.05)。Western blot结果显示,与对照组比较,高氟、低氟组仔鼠海马区NR2B的蛋白表达增强(P<0.05);拮抗处理后,高氟拮抗组仔鼠海马NR2B蛋白表达下降(P<0.05)。与对照组比较,高氟、低氟组仔鼠海马区p-NR2A蛋白表达增强(P<0.05);加入MK-801处理,各拮抗剂组与无拮抗剂组比较,p-NR2A蛋白表达量均有所下降(P<0.05)。与对照组和低氟组比较,高氟组仔鼠海马区p-NR2B蛋白表达显著增强(P<0.05);加入MK-801处理后,与高氟组比较,高氟拮抗组仔鼠海马区p-NR2B蛋白表达下降(P<0.05)。结论:过量氟可激活大脑自由基及NMDA受体活性,引起脑组织形态及功能出现损伤。