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伪狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)是一种嗜神经的α疱疹病毒，可引起猪的繁殖障碍和多种家畜与野生动物的致死性感染，严重危害世界养猪业的健康发展。EP0是PRV的早期基因，它与PRV的立即早期基因IE180一起调节病毒的复制。因此，深入研究EPO基因的功能对阐明PRV复制与潜伏感染的机理具有重要的参考意义。 本研究利用PCR扩增得到PRV EP0基因的编码区，回收PCR产物，与pMD-18T载体连接后转化到感受态细胞E.coli DH5α中。通过菌落PCR鉴定正确后，用质粒抽提试剂盒提取质粒，并命名为pMD-EP0；用EcoRⅠ和HindⅢ限制性内切酶双酶切pMD-EP0，与经同样双酶切处理的pET-32a(+)在T4 DNA连接酶作用下进行连接，转化感受态细胞E.coli DH5α，经菌落PCR鉴定正确后提取重组质粒pET-EP0，并进行酶切鉴定和测序分析；将pET-EP0转化大肠杆菌BL21(DE3)后用IPTG诱导，经SDS-PAGE和Western-blotting检测EP0蛋白的表达情况；对EP0重组蛋白大量诱导表达，利用HisTrap FF亲和柱对表达的蛋白进行纯化，使用超滤离心管对纯化的EP0重组蛋白进行浓缩和脱盐。结果表明，EP0蛋白获得了表达，表达蛋白大小为75kDa；Western-blotting结果显示表达的蛋白具有良好的反应原性；通过柱纯化及浓缩脱盐获得了高纯度的重组蛋白。 本研究以纯化的EP0重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠，共免疫4次。采血，建立间接ELISA方法测定血清抗体效价。取血清效价最高的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG4000的作用下进行细胞融合。用HAT选择培养基对杂交瘤细胞进行培养，利用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞。采用有限稀释法对阳性孔进行亚克隆，重复3次，获得了2株能稳定分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株，分别命名为2C6、2812。将阳性杂交瘤细胞注射BALB/c小鼠制备腹水，测定腹水效价在1:105以上。间接ELISA和Western-blotting结果显示，2株单抗的腹水均能特异性识别EP0重组蛋白。 本研究成功地表达了EP0重组蛋白，并且以纯化的EP0重组蛋白为抗原获得了稳定、特异、高效的单克隆抗体，为其蛋白定位及其功能研究奠定了良好的基础。