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目的 分离培养兔骨髓间充质干细胞；体外诱导兔骨髓间充质干细胞向软骨方向分化；自体骨髓间充质干细胞移植修复兔关节软骨损伤。 方法 采集兔骨髓间充质干细胞，密度梯度离心与贴壁培养结合对其进行分离纯化，体外培养扩增，绘制生长曲线，测定倍增时间，观察细胞的生长状态；分别在高密度（1×106／ml）和低密度（1×104／ml）状态下用10ng／ml转化生长因子β1（TGF-β1）诱导骨髓间充质干细胞向软骨方向分化，光学及电子显微镜观察细胞，用免疫组织化学、原位杂交、特殊染色方法检测Ⅱ型胶原及软骨基质成分的表达；自体骨髓间充质干细胞移植修复兔关节软骨损伤，实验组用藻酸盐载体材料负载经过诱导的骨髓间充质干细胞移植于兔关节软骨损伤区，对照组植入不含细胞的藻酸盐材料或不做任何处理，分别于术后6周和12周取材，做大体观察、光学显微镜、电子显微镜等观察软骨损伤的修复情况。 山冠穿医科大学刁;页性:学t立宝仑文 结果密度梯度离心后，活细胞比例在95%以上，贴壁培养筛选后细胞得到进一步纯化，细胞形态均一，呈纺锤形，体外培养的细胞经历了生长潜伏期、对数生长期和生长平台期，平均倍增时间为32.5小时，细胞的增殖能力随传代次数的增加而有所下降;long/ml TGF一pl可诱导高密度培养状态的骨髓间充质千细胞定向分化为软骨细胞，表达H型胶原mRNA，分泌H型胶原蛋白，产生软骨基质成分，而低密度培养的骨髓间充质干细胞未能被诱导成软骨细胞;自体骨髓间充质十细胞移植术后6周，实验组软骨损伤区己由透明软骨样修复组织填充，术后12周软骨和软骨下骨得到良好修复，修复组织进一步改建，免疫组化和原位杂交证实修复组织内产生了H型胶原，透射电镜显示细胞内细胞器发达，细胞周围有胶原纤维产生，两对照组损伤区由纤维组织修复，实验组组织学评分明显优于两对照组。 结论密度梯度离心与贴壁培养相结合是一种分离骨髓间充质干细胞的高效方法，体外培养的兔骨髓间充质十细胞生长稳定，增殖力强，可作为组织工程的种子细胞;10ng/m1TGF一日，可以诱导骨髓间充质干细胞向软骨方向分化，骨髓间充质二干细胞向软骨方向的分化与培养细胞的密度有关;以藻酸 山卫厅医科大学萄万d了学1立i仑文盐载体材料负载骨髓间充质一[细胞移植可促进关节软骨损伤的修复，有望成为临床治疗关节软骨损伤的新方法。