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目的: 探讨蓝光导致人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium, RPE)细胞损伤的分子机理、Gelsolin基因表达对视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用,为视网膜光损伤的基因治疗提供依据。 方法: 1.原代与传代人RPE细胞的体外培养,并用蓝光进行不同强度和不同时间的光照处理。 2.人RPE细胞凋亡相关检查:TUNEL染色、透射电镜和流式细胞仪检测。 3.用罗丹明123荧光染料孵育人RPE细胞,流式细胞仪检测线粒体膜电位(△Ψ m)。 4.用酶联免疫法测定cytochrome C和Caspase-3的活性。 5.PCR扩增人骨骼肌Gelsolin cDNA。 6.采用DNA定向连接技术构建Gelsolin基因重组真核表达载体。 7.重组真核表达载体中Gelsolin cDNA片段限制性内切酶酶切分析和测序鉴定。