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单个B细胞抗体制各技术是通过基因工程的方法制备全人源单克隆抗体的一种新型技术，该技术通过分选的B细胞进行PCR，可保留重链和轻链可变区的天然配对，具有基因多样性好、效率高、全人源、需要的细胞量少等优势，巢式PCR和抗体亲和力筛选是此技术抗体制备的关键步骤。 狂犬病是由狂犬病病毒(rabies virus，RV)引起的人兽共患疾病，是一种全球性分布的疾病，多发生在发展中国家。WHO建议在三级暴露后的治疗包括主动和被动免疫，即通过疫苗和免疫球蛋白进行紧急治疗，获得快速的保护作用，但免疫球蛋白多来源于马及人血清，异源性和副作用导致了免疫球蛋白的使用量受限。应用特异性单克隆抗体防治狂犬病可以克服多抗血清的诸多不足，同时具有安全性好、特异性强、可大量生产等优点，效果与HRIG近似，适合用于暴露后治疗。本课题的研究工作，包括:1）巢式RT-PCR条件的摸索及优化。以人PBMCs为样本，提取其RNA后，逆转录为cDNA。采用不同的温度梯度扩增抗体的重链和轻链，确定合成的引物可以用于抗体基因的扩增，以及抗体重链和轻链巢式RT-PCR反应体系、引物浓度以及退火温度。2）表达载体的改造。表达载体上插入人源抗体信号肽和人源抗体的恒定区，构建多克隆酶切位点(EcoRⅠ、NheⅠ和PvuⅡ)。通过摸索293T细胞上的转染和表达条件，成功获得抗体表达载体和表达条件。3）分选后抗体基因共配对成功42对，插入载体在293T细胞获得表达。抗体基因序列分析，配对成功的重链中重排V基因包括1～4个亚型，其中亚型1、2、3、4所占比例分别为23.8％、2.4％、35.7％和38.1％。CDR3的长度主要有10、11、13、14和18个氨基酸，所占比例分别为2.4％、33.3％、4.8％、19％和40.5％。 最终，通过亲和力筛选，获得3个抗狂犬病病毒糖蛋白结合功能的抗体，分别为IgG24、IgG150和IgG178，这三个抗体与狂犬病病毒CVS-11株、aG株和CTN株均有不同程度的结合功能。小鼠中和实验显示IgG150和IgG178具有一定的中和活性。