【摘 要】
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为了分析突变体材料中ETH对Auxin的调控作用,建立高度专一和灵敏的内源吲哚乙酸(IAA)定量检测技术是必要的.为此,我们首先制备了专一识别IAA的单克隆抗体.该抗体对甲酯化的IA
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为了分析突变体材料中ETH对Auxin的调控作用,建立高度专一和灵敏的内源吲哚乙酸(IAA)定量检测技术是必要的.为此,我们首先制备了专一识别IAA的单克隆抗体.该抗体对甲酯化的IAA有专一性识别,而对IAA的系列类似物及其代谢中间产物的交叉反应均极低.用该抗体建立了定量测定IAA的固相抗原型酶联免疫吸附测定法(ELISA),其检测范围为0.98-1000pmol/50ul,灵敏度为0.49pmol.这种基于单克隆抗体的IAA ELISA具有高灵敏度特征,适用于快速、高效、专一地定量分析微量植物组织中的IAA水平.以拟南芥的ETH过量产生型突变体(etol-1),根对ETH不敏感型突变体(eirl-1,地上部对ETH响应),ETH不敏感型突变体(etrl-3,地上部和根均对ETH不敏感)及其野生型(WT,Columbia生态型)为实验材料,利用根的向重力性反应为模式,分析了其 ETH对Auxin效应的调控及其原因.从12d龄拟南芥幼苗的形态学表现上看,etol-1根的向重力性与WT相比明显增强了,而eirl-1和etrl-3的向重力性则明显减弱,黄化的etrl-3茎的负向重力性也减弱.这种表型上的差异表明:①高水平的ETH加强了根的正向重力性反应;②ETH信号转导的阻断引起根的正向重力性及茎的负向重力性减弱或消失.内源IAA定量分析表明,etol-1突变体的地上部和根部IAA含量都增高,表明高水平的ETH可能促进IAA的生物合成或抑制IAA的降解,由此增强了向重力性反应;eirl-1和etrl-3突变体地上部的IAA增高,但根部的IAA缺失,表明对ETH不敏感(ETH信号转导的阻断)导致IAA从茎尖合成部位向基部的极性运输功能丧失,引起根部缺乏IAA,导致向重力性的减弱.上述两方面结果揭示:在向重力性反应中,ETH是通过调节IAA的水平和IAA极性运输两种机制起作用的.
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