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植物内生真菌由于长期生活在宿主植物体内,与宿主协同进化,从而形成了互惠共生的关系。随着对植物内生真菌的研究日益深入,内生真菌次生代谢产物的研究趋向活跃。研究表明,内生真菌具有丰富的次生代谢产物多样性。众多内生真菌活性成分已得到了分离纯化和鉴定,成为发现新型化合物的一个重要来源和途径。鉴于植物内生真菌的特点,本课题选择传统中草药滇重楼[ParispolyphyllaSmithvar.yunnan-ensis(Franch.)Hand.Mazz.]为研究对象,开展了滇重楼内生真菌的微生物学研究,抗菌活性筛选研究,活性物质基础化学研究几个方面,主要取得了以下成果。
1、从滇重楼块状茎中分离出166株内生真菌,对其进行形态分类鉴定,归于4目,6科,21个属,描述了滇重楼植物内生真菌在种群及数量上的多样性特征。
2、同时,选择与人类和植物相关的37株病原微生物作为抗菌活性筛选指示菌,开展了滇重楼植物内生真菌抗菌活性的初步研究。结果表明,4株滇重楼内生真菌对细菌,植物致病真菌,皮肤致病真菌等多种供试病原微生物具有显著抑制生长的作用。
3、采用传统分类方法结合分子生物学手段,完成了3株抗菌活性菌株的真菌分类学研究,结果获得了黑孢属的一个新种,拟命名为重楼黑孢霉[Nigrosporapolyphyllaensis.nov.SunetChen];赫昆青霉P.paraherquei的一个新变种-赫昆青霉云南变种[Penicilliumparaherqueivar.yunnanensisn.var.SunetChen];以及康宁木霉[T.koningii]。
4、在抗菌活性筛选实验中发现滇重楼内生真菌C196菌株分别对细菌甲型溶血链球菌、白色葡萄球菌、人型结核分枝杆菌、藤黄八叠球菌、宋内氏志贺氏菌,皮肤致病真菌白色念珠菌,植物致病真菌串珠霉属、木霉共8种指示菌有抑制细胞生长作用。为了研究该活性菌株的抑菌作用机理,我们对其次生代谢产物进行了研究,从发酵液中分离到化合物1个,通过氢谱和碳谱将其鉴定为青霉酸。
5、对分离得到的青霉酸化合物进行了抗菌活性检测,发现其对分别对细菌甲型溶血链球菌、白色葡萄球菌、人型结核分枝杆菌、藤黄八叠球菌、宋内氏志贺氏菌形成的抑菌圈直径大而明显,说明其抑菌作用较强。