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目的:探讨大鼠胚胎神经干细胞(NSCs)的分离、培养、分化及鉴定的条件与方法;在体外进行转染、筛选、扩增、鉴定,获取稳定表达CD基因工程化神经干细胞;探讨CD基因修饰的神经干细胞离体及在体情况下对C6胶质瘤细胞增殖的抑制作用,寻求胶质瘤的基因治疗新方法。方法:1.分离孕14～16 d SD大鼠胚胎脑皮质及皮质下区域NSCs,无血清培养基(DMEM/F12,含bFGF、EGF、B27等)条件下培养,通过有限稀释法克隆、传代,含血清培养基诱导分化,免疫细胞化学法鉴定神经干细胞及分化后的细胞。2.体外扩增并酶切鉴定pCMVCD质粒;采用Lipofectamine2000通过脂质体介导法转染NSCs,G418筛选阳性克隆,免疫细胞化学鉴定重组子,检测该真核表达载体的表达及转染效率。3.将NSCs/CD细胞与C6细胞共培养,在加入5-FC的情况下,观察胶质瘤细胞生长情况,MTT法检测细胞存活率;建立裸小鼠脑胶质瘤原位动物模型,随机分成试验组及对照组,移植NSCs/CD细胞后,腹腔注射5-FC,观察NSCs/CD-5-FC自杀基因系统在活体内对胶质瘤的抑制作用。结果:1.在本实验中,我们成功地分离并鉴定了孕14～16天SD大鼠胎鼠脑皮质及皮质下的NSCs,并在体外培养增殖及分化。2.pCMVCD质粒经脂质体介导法成功转染NSCs,G418筛选后可增殖形成抗性细胞克隆。免疫荧光双标染色结果可见抗性细胞克隆表达NSCs的特异性抗原-nestin,同时表达CD基因。3.NSCs/CD细胞与C6细胞共培养时,加入5-FC的情况下,与对照组相比较,均有显著意义(P<0.01),能够明显抑制肿细胞的增殖,同时具有明显的旁观者效应;成功建立裸小鼠脑胶质瘤动物模型,移植NSCs/CD细胞及腹腔注射5-FC后,可观察到明显的抗肿瘤作用。结论:CD基因修饰神经干细胞的自杀系统抑制胶质瘤细胞生长,效果显著,不仅归功于神经干细胞的迁移能力、能够迁移到胶质瘤细胞周围、稳定表达目的基因、将前体药物转化为具有杀死肿瘤细胞作用的药物,从而抑制肿瘤生长,同时本自杀基因系统的旁观者效应也是比较明显的。神经干细胞作为目的基因载体来治疗胶质瘤,可为脑胶质瘤的治疗寻找一条切实可行的道路。