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根据GenBank发表的序列，对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)H52株、H120株和M4l株全基因组序列进行比较，设计并合成了两对特异性引物，其中A引物能以M41株模板，特异性扩增出1791bp的目的片断，从而特异鉴定IBV M41株；另一对B引物能以H52株和H120株为模板，特异性扩增1700bp的目的片断，再用限制性内切酶Nae I对PCR产物进行酶切，H120株能够被切成1000bp和700bp两个片段，而H52株的PCR产物不存在该酶切位点，从而能区分H52株和H120株。本研究建立的方法和技术具有快速、简单、特异等优点，进一步完善了种毒特异性检验方法，为IBV活疫苗的分子鉴别检验奠定基础。