广金钱草根瘤菌生物多样性及其对药材质量的影响

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广金钱草[Desmodium styracfolium(Osb.)Merr.]是豆科山蚂蝗属植物,其性甘、淡、凉;具有清热除湿,利尿通淋之功效,也是王老吉凉茶的主要成分。作为岭南地区传统中草药,广东省不同地区虽已建立起相应广金钱草规范化种植基地,对广金钱草规范化种植各个环节,如:田间管理、采收时间、土壤类型等进行了系统研究,但是对于能够与广金钱草建立共生关系的根瘤菌资源以及根瘤菌对宿主在生长过程中和最终药材品质的影响未有涉及。本研究从不同类型土壤中共分离纯化广金钱草根瘤菌52株,不同盐度、酸碱度、温度耐受性实验测定表明,9株菌能够耐受4%NaCl;33株菌在pH5.0的YMA平板上生长良好;20株菌能够在45℃生长。供试的广金钱草根瘤菌对不同类型的重金属表现出不同的耐受性,绝大多数供试菌株均可以在添加4mmol/L的Zn2+,Pb2+和含锌、铅双盐的平板上生长良好;而仅有2株供试菌株能够在添加4mmol/L的Cu2+的平板上生长。BOX-PCR基因指纹图谱分析共获得32种遗传图谱。经16SrDNA基因和recA基因系统发育分析发现,供试的52株菌中有2株位于根瘤菌属系统发育分支,1株位于中华根瘤菌属系统发育分支,其余均为慢生根瘤菌属菌株,且分别与埃氏慢生根瘤菌和豆薯慢生根瘤菌亲缘关系近。选取抗逆性强的慢生根瘤菌菌株混合接种蛭石盆栽种植的广金钱草植株,并测定低氮条件下结瘤和未结瘤广金钱草的地上和地下部分主要药效成分总黄酮和多糖含量。结果表明:广金钱草地上部的结瘤植株与未结瘤植株总黄酮百分含量分别为3.12%和3.5%,经方差分析两者差异显著(P<0.05);广金钱草地下部的结瘤植株和未结瘤植株总黄酮百分含量分别为1.26%和0.89%,经方差分析两者差异极显著(P<0.01);结瘤广金钱草地上部多糖含量高于未结瘤广金钱草地上部,但差异不显著。采用液相质谱法比较结瘤和未结瘤总黄酮组分发现,结瘤组的地上部总黄酮组分与未结瘤差异明显,主要组成成分多于未结瘤组;而结瘤组和未结瘤组地下部总黄酮组分未有明显差异。由此可见,与广金钱草建立共生关系后,根瘤菌对药材质量尤其是总黄酮的含量和组成成分均有明显影响,而对广金钱草特定药用活性组分的含量影响及机制还需进一步深入研究。
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