论文部分内容阅读
里氏木霉作为纤维素酶分泌的高产菌株,其纤维素酶的表达受到多种信号的调控.转录因子是通过与特定DNA序列结合进而调节基因转录.而磷酸化修饰是生物体内最重要的翻译后修饰方式之一,也是迅速调节转录因子活性的最为普遍和重要的机制之一.CKII是一种高度保守的、在真核细胞中普遍存在的、具有多种生理功能的非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,国内外大量的研究表明,CKII广泛地参与细胞功能的调控,如基因表达、蛋白合成等,其作用底物超过307种,其中约60种以上为调节基因表达的转录因子.本课题的主要目的在于研究纤维素酶的翻译后修饰阶段,转录因子是否受到蛋白激酶的磷酸化作用,及其转录因子被磷酸化后产生的生理功能是否发生变化,在磷酸化过程中是众多激酶中的哪个激酶在转录因子的哪个位点的磷酸化导致的最终纤维素酶表达的变化.本实验通过运用KinasePhos软件对里氏木霉中的多个转录调控因子进行了预测,发现除了Cre1的Ser241以外,负调控因子Cre2的Thr19和Ser259、Cre4的Ser130和Ser479、ACE1的Ser420以及转录激活因子Xyr1的Thr571和Thr761,Clr2的Ser187和Ser188也可能是CKII的作用靶点,进一步,我们用定点突变技术成功地消除了里氏木霉Cre1的CKII磷酸化,qPCR数据证明突变后的纤维素酶(cbh1,cbh2)转录水平发生了大幅的上调.同时,我们对另一个近几年新发现的里氏木霉中转录因子Clr2也进行了磷酸化位点的预测,通过体外磷酸化实验及点突变实验,对纤维素酶的产生变化进行对比,从而对Clr2是否是因为被蛋白激酶磷酸化进而调控纤维素酶的表达进行研究,实验仍在进行中.最终完善蛋白质磷酸化修饰对于里氏木霉纤维素酶表达相关主要转录调控因子的影响的研究.