【摘 要】
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禽网状内皮组织增殖病(Reticuloendotheliosis,RE)是由禽网状内皮组织增殖病病毒(Reticuloendothelio-sis Virus,REV)引起禽免疫抑制、致死性网状细胞瘤、生长抑制等综合征的免疫抑制病.本研究基于马立克病毒(Mareks disease virus,MDV)meq基因缺失株SC9-1利用同源重组技术构建表达REV env蛋白的重组MDV.首先,利用高保
【出 处】
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第五届全国禽病分子生物技术青年工作者会议
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禽网状内皮组织增殖病(Reticuloendotheliosis,RE)是由禽网状内皮组织增殖病病毒(Reticuloendothelio-sis Virus,REV)引起禽免疫抑制、致死性网状细胞瘤、生长抑制等综合征的免疫抑制病.本研究基于马立克病毒(Mareks disease virus,MDV)meq基因缺失株SC9-1利用同源重组技术构建表达REV env蛋白的重组MDV.首先,利用高保真taq酶扩增REV env基因,酶切后克隆进真核表达载体pcDNA3.1中,经酶切测序鉴定后,提取阳性重组质粒转染进鸡胚成纤维细胞(chick embryo fibroblast,CEF).以REV单克隆抗体11B118作为一抗对转染重组质粒CEF细胞进行间接免疫荧光试验(Indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定.其次,以鉴定阳性的重组质粒作为模板扩增表达REV env的表达盒,与卡那霉素抗性基因拼接克隆进pUC18载体.以MDV SC9-1meq基因前后各50bp碱基作为同源臂扩增REV env的表达盒以及卡那霉素抗性基因,利用Red E/T同源重组插入SC9-1基因组的meq基因.最终,大量提取经测序鉴定阳性的重组质粒利用磷酸钙转染进CEF细胞,拯救重组MDV,待出现MDV典型蚀斑后,以REV单克隆抗体11B118作为一抗进行IFA鉴定.结果显示,REV env基因能够在真核表达载体pcDNA3.1成功表达.以MDV SC9-1传染性克隆作为载体构建的重组质粒转染进CEF细胞6天后出现MDV特有的细胞病变,以11B118作为一抗经IFA鉴定,显示特异性的亮绿色荧光.综上,以pcDNA3.1载体中cmv启动子构建的表达REV env蛋白的表达盒能够在MDV SC9-1基因组中稳定表达REV env蛋白,构建的重组病毒在CEF细胞上的复制水平没有显著变化,在细胞上传代10代仍然能够稳定表达REV env蛋白.为今后利用MDV SC9-1构建重组载体疫苗提供参考.
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多杀性巴氏杆菌(Pasteurellamultocida,PM)是一种会引起畜禽发生出血性败血症或传染性肺炎的病原菌.该菌引起的禽霍乱对养鸭业造成的影响很大.随着抗菌药物的不合理应用,多杀性巴氏杆菌的耐药率不断提高,耐药范围更广,多重耐药的现象越来越多.多杀性巴氏杆菌的耐药可能与耐药质粒、耐药基因突变、外排泵过量表达、整合子介导等因素有关.为了解鸭源多杀性巴氏杆菌的耐药机制,本课题在对多重耐药菌株
禽结核病是由禽结核杆菌(Mycobacterium avium subsp avium,MAA)引发的一种慢性接触性传染病.目前已报道禽结核病可感染野生禽类,观赏禽类以及家禽等.不同种的禽类对该病的抵抗力有所不同,其中家鸭有中等程度的抵抗力.本研究采用免疫组织化学方法研究自然感染禽结核病的北京鸭体内的MAA的分布规律.
禽流感是由正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒引起的禽类烈性传染病.根据其在6周龄雏鸡静脉内致病指数的不同,又可将其分为高致病性(HPAIV)和低致病性(LPAIV)两种,其中H5N1亚型禽流感属于高致病性禽流感,对家禽的致死率可达100％.除感染禽外,还可感染人和哺乳动物,引起人类死亡,具有重要的公共卫生学意义.近年,国内应用的H5亚型禽流感疫苗主要包括全病毒灭活疫苗和重组活载体疫苗.灭活疫苗一般选
H3N2亚型流感病毒具有广泛的感染宿主谱,除了可以感染野鸟和家禽外,还可以感染猪、犬、猫、雪貂等多种哺乳动物,而且是造成人的季节性流感最直接的病原之一.近年来的禽流感监测数据显示,H3N2亚型禽流感病毒在水禽中分离率相对较高、流行地区广,病毒分离阳性率有逐年增多的趋势.为了解近年来我国H3N2亚型禽流感病毒的流行情况,评估该亚型禽流感病毒对哺乳动物感染和传播的潜在风险,对2009-2014年间在我
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