【摘 要】
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对虾白斑综合症杆状病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是一种引起对虾暴发性流行病的主要病原体,其感染性和致病性使对虾养殖业面临巨大挑战.WSSV囊膜蛋白VP28已被初
【机 构】
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广西北部湾海洋珍稀物种保护及生物多样性利用重点实验室广西钦州学院 广西钦州535000
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对虾白斑综合症杆状病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是一种引起对虾暴发性流行病的主要病原体,其感染性和致病性使对虾养殖业面临巨大挑战.WSSV囊膜蛋白VP28已被初步证明在病毒吸附与入侵中起着关键作用.本研究提取病虾的总DNA,用WSSV特异性的检测引物进行扩增,从17个样品里检测到有3个WSSV病毒感染,根据GenBank上WSSV的基因组及囊膜蛋白基因VP28的序列,设计并合成巢式PCR扩增引物,成功从病虾DNA提取物中扩增得到615bp的VP28基因,利用限制性内切酶XhoI和NcoI酶切大肠杆菌分泌表达载体pET22b和VP28基因,连接后成功构建重组表达载体pET22b-VP28并转化大肠杆菌BL21(DE3),经过IPTG诱导表达后,VP28蛋白经过信号肽pel的引导进入周质腔分泌表达,通过休克法提取VP28,并利用Ni亲和层析柱从1L大肠杆菌发酵液中纯化获得了5mg纯的VP28蛋白.本研究为WSSV病毒单抗的制各、快速检测试剂盒及免疫制剂的研制奠定了基础.
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