对虾白斑综合病毒(WSSV)囊膜基因vp28的克隆及在大肠杆菌中的分泌表达与纯化

来源 :第九届世界华人虾蟹养殖研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kb8iii
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  对虾白斑综合症杆状病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是一种引起对虾暴发性流行病的主要病原体,其感染性和致病性使对虾养殖业面临巨大挑战.WSSV囊膜蛋白VP28已被初步证明在病毒吸附与入侵中起着关键作用.本研究提取病虾的总DNA,用WSSV特异性的检测引物进行扩增,从17个样品里检测到有3个WSSV病毒感染,根据GenBank上WSSV的基因组及囊膜蛋白基因VP28的序列,设计并合成巢式PCR扩增引物,成功从病虾DNA提取物中扩增得到615bp的VP28基因,利用限制性内切酶XhoI和NcoI酶切大肠杆菌分泌表达载体pET22b和VP28基因,连接后成功构建重组表达载体pET22b-VP28并转化大肠杆菌BL21(DE3),经过IPTG诱导表达后,VP28蛋白经过信号肽pel的引导进入周质腔分泌表达,通过休克法提取VP28,并利用Ni亲和层析柱从1L大肠杆菌发酵液中纯化获得了5mg纯的VP28蛋白.本研究为WSSV病毒单抗的制各、快速检测试剂盒及免疫制剂的研制奠定了基础.
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