【摘 要】
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目的:建立一种基于磁珠的HBV/HCV/HIV并行核酸检测技术.方法:利用磁珠技术提取HBV/HCV/HIV核酸;以PCR为手段评价磁富集、磁珠法核酸提取的效果;利用电泳、凝胶成像等方法评价多重PCR的扩增效果、利用化学发光法检测目标病毒核酸的信息.结果:以磁珠法提取提取和富集HBV/HCV/HIV病毒核酸,将HCV/HIV病毒RNA逆转录为cDNA,利用HBV/HCV/HIV引物进行35个循环扩
【机 构】
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江苏省血液中心 东南大学生物电子学国家重点实验室
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目的:建立一种基于磁珠的HBV/HCV/HIV并行核酸检测技术.方法:利用磁珠技术提取HBV/HCV/HIV核酸;以PCR为手段评价磁富集、磁珠法核酸提取的效果;利用电泳、凝胶成像等方法评价多重PCR的扩增效果、利用化学发光法检测目标病毒核酸的信息.结果:以磁珠法提取提取和富集HBV/HCV/HIV病毒核酸,将HCV/HIV病毒RNA逆转录为cDNA,利用HBV/HCV/HIV引物进行35个循环扩增,实现HBV/HCV/HIV的三重扩增.将扩增的DNA片段与修饰在磁珠上的特异性HBV/HCV/HIV探针杂交,在外磁场下分离除去非特异性吸附片段,与修饰有亲和素的化学发光中心(碱性磷酸酶)结合,洗涤后向微孔内加入发光底物(AMPPD)并将反应板转移到化学发光仪中,通过化学发光读板机读取每孔的发光强度.本方法能够同时检测出HBV、HCV和HIV的最低拷贝数分别为10,10,100拷贝数/毫升血清.结论:获得一种的快速、准确、高灵敏、低成本HBV/HCV/HIV检测方法.
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