【摘 要】
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Aptamer因具有分子量小、化学稳定性好、合成简单、修饰灵活等优点,近年来被认可为“化学抗体”在肿瘤分型、诊断和治疗等领域得到了广泛应用.基于Aptamer的肿瘤细胞检测
【机 构】
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化学生物传感与计量学国家重点实验室,湖南大学生物学院,湖南大学化学化工学院,生物纳米与分子工程湖南省重点实验室,410082,长沙
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Aptamer因具有分子量小、化学稳定性好、合成简单、修饰灵活等优点,近年来被认可为“化学抗体”在肿瘤分型、诊断和治疗等领域得到了广泛应用.基于Aptamer的肿瘤细胞检测技术目前主要依赖于“always on”分析模式.由于该模式探针信号始终存在,应用中往往表现出背景信号高、灵敏度有限、需借助洗脱程序、操作复杂等缺点.与之相比,激活式分析策略由于只有在特定靶标刺激下才能产生信号输出,有望极大改善检测灵敏度并简化分析过程.但现阶段激活式Aptamer探针的发展尚处于起步阶段,仅局限于利用分子内链置换原理设计的发夹型探针[1,2],仍然在序列优化、普遍适用性等方面存在不足.基于此,本工作即以裂开型Aptamer探针的两条分裂片段作为识别臂,中间以Cy5修饰的短核苷酸链相连并进一步通过与BHQ3修饰的互补链杂交形成信号输出区域,提出了一种新型的裂开型激活式Aptamer探针设计策略.该探针在游离状态下,中间双链区域稳定杂交而两条Aptamer分裂片段相互远离,荧光信号处于淬灭状态；而当与靶细胞作用后,裂开型Aptamer在靶标诱导下可形成特定的识别构型并迫使中间双链区域解链,从而使Cy5和BHQ3相互远离,荧光信号处于激活状态.以本实验室自行构建的裂开型Sgc8c探针为模型,成功构建了一种特异而灵敏的CCRF-CEM人白血病细胞激活式检测探针.结合流式细胞术,该探针用于靶肿瘤细胞的检测信噪比高达～20.7,显著提高至“always on”模式的～4.8倍,可有效分析低至46个靶肿瘤细胞.该探针设计简单灵活,对于其他肿瘤细胞的裂开型Aptamer具有普遍适用性.
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