【摘 要】
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生物微阵列芯片以其特有的高通量、微量化及高灵敏度等特点正越来越成为生命科学研究中的重要分析技术.将微阵列芯片通量化检测的优势与微流控芯片微量化样本分离与富集的优势相结合,有望为生物分子富集与检测提供自动化程度及灵敏度更高的分析微系统.在适配体筛选方面,我们建立了基于蛋白质微阵列芯片(Protein Microarray)和微流控芯片(Microfluidic)的适配体筛选方法(PMM-SELEX)
【机 构】
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南京大学化学化工学院,生命分析国家重点实验室,南京,210023
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生物微阵列芯片以其特有的高通量、微量化及高灵敏度等特点正越来越成为生命科学研究中的重要分析技术.将微阵列芯片通量化检测的优势与微流控芯片微量化样本分离与富集的优势相结合,有望为生物分子富集与检测提供自动化程度及灵敏度更高的分析微系统.在适配体筛选方面,我们建立了基于蛋白质微阵列芯片(Protein Microarray)和微流控芯片(Microfluidic)的适配体筛选方法(PMM-SELEX),通过阵列芯片检测仪获取蛋白质微阵列荧光信号,实现筛选的在线监测.经过七轮连续筛选后可获得对于乳铁蛋白(Lactoferrin)具有高特异性、高亲和性的适配体序列.在使用此筛选方法进行的三次重复筛选结果中,均得到了相同的五条适配体序列.通过表面等离子共振方法(Surface PlasmonResonance,SPR)拟合求得以上五条适配体序列其Kd 值均低至nmol/L.并采用相关适配体建立了荧光偏振(fluorescence polarization,FP)的乳铁蛋白测定新方法.发展的PMM-SELEX方法在适配体筛选的研究中展示出了其稳定、准确和高效的特点.在适配体应用检测方面,我们通过巯基自组装、亲和素-生物素相互作用等途径成功实现了适配体探针在纳米银、纳米硅球、聚多巴胺球纳米探针等表面的功能化制备.在此基础上,我们将功能化的纳米探针应用于可分离与富集的微流控芯片系统中,分别建立了荧光增强检测、可视化检测等多种微流控分析检测新方法.研究内容包括可视化检测凝血酶的的适配体微流控芯片及快速、高效分离检测目标蛋白质PDGF-BB 的微流控纳米银阵列芯片等,通过利用对蛋白质分子具有特异性识别作用的适配体作为亲和分离的新材料,在微流体芯片系统中实现微量蛋白质的特异性富集、分离与灵敏检测.
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