【摘 要】
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本研究以柔嫩艾美耳球虫顶体膜蛋白1为诱饵,在柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交cDNA文库中筛选与之相互作用的蛋白,为研究参与子孢子入侵过程中的相关蛋白提供重要的分子基础.
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室,上海200241
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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本研究以柔嫩艾美耳球虫顶体膜蛋白1为诱饵,在柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交cDNA文库中筛选与之相互作用的蛋白,为研究参与子孢子入侵过程中的相关蛋白提供重要的分子基础.首先利用酵母双杂交技术成功构建了柔嫩艾美耳球虫子孢子的cDNA文库,以cDNA文库反复冻融后上清为模板,可扩增出柔嫩艾美耳球虫特异性基因,表明构建的文库质量较好.同时,以EtAMA1基因为目标,构建了应用于酵母双杂交系统的诱饵载体pGBKT7-EtAM-A1,并对该诱饵载体进行鉴定、自转录活性检测和细胞毒性检测.结果显示经过4次筛选后获得了710个蓝色克隆,随机挑选42个蓝斑克隆提质粒后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,PCR鉴定后测序,获得了14个单一的阳性质粒,其中5个未知基因、7个未命名蛋白、2个已报道蛋白.这些结果为以后进一步研究鸡球虫入侵宿主细胞提供了基础.
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