根癌农杆菌介导芜菁花叶病毒Hc-Pro基因转化榨菜的研究

来源 :2004年全国蔬菜分子育种研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:scorpiokyan
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以榨菜子叶诱导的愈伤组织为外植体,建立了根癌农杆菌介导芜菁花叶病毒Hc-Pro基因在榨菜上的高效转化体系.通过对影响根癌农杆菌转化的几个因素的研究发现,继代次数、共培养温度以及共培养时间都对转化效率有一定的影响.继代2次,24℃下共培养2天时,转化效率最高,达1.92﹪.再生的部分植株经PCR检测表明,目的基因已经整合到榨菜基因组中,ELISA检测表明,转基因植株对芜菁花叶病毒有较好抗性.
其他文献
利用cDNA-AFLP技术,以A18和T16引物为引物对,对矮脚黄白菜(Brassica campestris L.ssp.chinensis Makino var.communis Tsen et Lee cv.Aijiaohuang)雄性不育两系不育株系与可育株系的表达差异进行分析,结果在可育中蕾和可育大蕾中特异表达的差异条带一条,且可育大蕾表达量强于可育中蕾;可育系连莲座期叶,开花期叶、花茎
根据GenBank中登录的拟南芥WRKY转录因子的保守序列设计引物,采用RT-PCR和3-RACE方法,从SA处理的不结球白菜抗病自交系苏州青中,获得了473bp的DNA片段.序列分析表明,该序列含有WRKY转录因子共有的WRKYGQK保守结构域,与拟南芥AtWRKY18氨基酸序列的同源性为83﹪,与拟南芥AtWRKY60同源性为72﹪,表明已经成功克隆了不结球白菜WRKY1基因3末端cDNA序列
根据从Pentadiplandra brazzeana Baillon中分离获得的Brazzein甜蛋白基因的氨基酸序列,人工合成了全长168bp(含有转录起始位点ATG以及终止子TAA)Brazzein甜蛋白基因,并克隆至pMD18-Teasy vector上.测序结果表明所获得的基因与Brazzein甜蛋白基因序列完全相符;同时从番茄中克隆果实特异表达启动子pE8,构建番茄果实特异表达载体pB
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采用RT-PCR方法,从甜瓜果实总RNA中扩增出目标cDNA片段(MAI),在GenBank中登记号为AF490425.将该基因片段定向插入到pPOK2的BamH Ⅰ/Sma Ⅰ克隆位点,构建了Anti-MAI植物表达双元载体,在根癌农杆菌介导下转化烟草,经PCR和PCR-Southern杂交检测,证明此基因已整合入烟草的核基因组中.
采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法将葡聚糖酶和几丁质酶基因共同导入西瓜(Citrullus lanatus)子叶外植体,经抗性筛选和组织培养获得再生植株.通过对转基因植株中插入序列的GUS染色鉴定和特异引物PCR检测,表明葡聚糖酶和几丁质酶基因已成功导入西瓜植株.
采用正交试验设计的方法,建立了西瓜RAPD分析的优化反应体系,在此基础上,对西瓜核雄性不育G17AB系进行了RAPD分析,筛选到了一个与西瓜育性基因连锁的RAPD标记A12,与育性基因之间遗传距离为8.1cM.
通过真空渗入法获得了转抗虫基因pinⅡ的不结球白菜.各独立转化株系在温室经自交后,对自交一代(T2代)进行了小菜蛾连续饲喂实验,并利用标记基因bar介导的除草剂Basta抗性进行了自交一代(T2)及二代(T3)中外源基因的遗传分离情况分析.结果表明获得的转pinⅡ基因白菜一些株系具有明显的抗虫效果,主要表现在影响小菜蛾的虫体发育,降低虫体体重,提高死亡率和降低虫体的化蛹率、羽化率等方面.通过除草剂
对108份我国茄子主要地方品种和35份主要选育品种进行了基于形态性状和基于PAPD/ISSR标记的遗传多样性分析,结果表明地方品种的遗传多样性(遗传多样性指数总和18.06)高于选育品种(15.83).聚类分析表明,地方品种和选育品种都可以分为4个类群,并在多变量对应分析中得到验证.此外,我们的研究还表明,在茄子种质资源遗传多样性研究中,ISSR标记是一种多态性丰富、简便高效的标记手段.
通过对由具有6个无毒基因不同表现型的马铃薯晚疫病菌构建的4个混合池进行cDNA-AFLP分析、共获得85个与无毒基因相关的差异表达片段,其中与无毒基因Avr1、Avr2、Avr3-Avr10-Avr11、Avr4相关的差异表达片段分别为20,28,16和21个.将这些差异表达片段对20个晚疫病病菌个体进行无毒基因差异表达验证,得到无毒基因连锁群Avr3-Avr10-Avr11的修选片段1个,即A1