【摘 要】
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研究农药、医药、化学品对中国仓鼠肺细胞V79在HRPT位点的基因诱变情况,对其致突变性进行评价.已广泛应用于遗传学和毒理学安全性评价中.由于试验周期短、方法简便、灵敏
【机 构】
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沈阳化工研究院安评中心,辽宁 沈阳 110021
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研究农药、医药、化学品对中国仓鼠肺细胞V79在HRPT位点的基因诱变情况,对其致突变性进行评价.已广泛应用于遗传学和毒理学安全性评价中.由于试验周期短、方法简便、灵敏度高等优点,优于常规的检测基因突变等短期遗传毒性试验.改良方法将5×105个细胞接种于100 mm平皿中,于37℃,5％ CO2培养箱中24h.试验根据预试受试物对细胞毒性大小及在培养液中的溶解度设4个剂量组,分别进行代谢活化和非代谢活化两种处理,代谢活化时选用苯并芘(BaP)作为阳性对照,处理浓度为10μM,非代谢活化时为选用甲基磺酸乙酯(EMS)作为阳性对照,处理浓度为1000 μg/ml.溶剂对照为水.在细胞染毒后第2d,表达的同时,将细胞按200个/孔的密度接种于6孔板中.每剂量组设5个孔,培养7d后,固定Giemsa染色,计数每个孔中的细胞集落数,计算出每个剂量组的细胞存活率.测定集落形成率评价细胞毒性,并用6-硫代鸟嘌呤(6-TM)进行突变体筛选.消化细胞分别接种于直径为100mm的培养皿,每个剂量3个重复,待细胞贴壁后加入6-硫代鸟嘌呤(6-TG),终浓度5μg/ml同时取上述消化后的细胞接种至培养皿中,每皿200个细胞,每个剂量接种5皿,筛选的细胞培养7～10 d后,固定、Giemsa染色,计数集落数并分别计算存活率和突变频率(MF).细胞毒性测定结果 无论代谢沾化与否,如各剂量组细胞均未出现细胞毒性,相对克隆形成率与对照组无差异.细胞突变频率测定结果 非代谢活化组各剂量的细胞突变频率均在1.0×10-5以下,代谢活化组各剂量组的细胞突变频率均在2.0×10-5以下,经X2检验,与阴性对照相比没有差异.而阳性对照组的细胞突变频率非代谢组和代谢组分别达到20.0×10-5以上和10.0×10-5以上,与阴性对照组相比差异极显著(P＜0.001).结论 采用改良的试验操作方法,同一受试物各剂量组、阴性对照组和阳性对照组的细胞突变频率与改良前的试验结果无显著差异.
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