【摘 要】
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脂肪酶(Lip)是一类有重要应用的工业用酶,在制药、食品加工、生物能源等方面有重要的应用前景.但水溶性的脂肪酶易失活,不易回收和重复使用.固定化酶是解决上述问题的重要手段.近年来众多对脂肪酶固定化的研究主要集中在载体和固定化方法的选择方面,其中使用来源丰富的天然材料作为酶的固定化载体是非常重要的研究方向.来源于植物生物质的纳米纤维素(NCFs)具有高强度、高比表面积、高反应活性、生物相容性好等优异
【机 构】
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华南理工大学大学制浆造纸工程国家重点实验室,广东,广州,510640 广东省发酵与酶工程重点实验室
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脂肪酶(Lip)是一类有重要应用的工业用酶,在制药、食品加工、生物能源等方面有重要的应用前景.但水溶性的脂肪酶易失活,不易回收和重复使用.固定化酶是解决上述问题的重要手段.近年来众多对脂肪酶固定化的研究主要集中在载体和固定化方法的选择方面,其中使用来源丰富的天然材料作为酶的固定化载体是非常重要的研究方向.来源于植物生物质的纳米纤维素(NCFs)具有高强度、高比表面积、高反应活性、生物相容性好等优异性能,具有作为Lip固定化载体的潜能.以TEMPO氧化法制备的NCFs带有羧基及醛基,在水相中能均匀分散,对脂肪酶具有强的特异性亲和力.因此本文将TEMPO氧化NCFs与脂肪酶混合,然后与戊二醛交联,再利用NCFs良好的成膜性,通过抽滤方法制备纳米纤维素固定化脂肪酶(NCFs-Lip)薄膜.探讨了NCFs的羧基含量、戊二醛用量、反应温度、pH以及反应时间等工艺参数对NCFs-Lip的酶活、负载量的影响.得到适宜的NCFs-Lip固定化膜制备条件是:NCFs的羧基含量为1.12 mmol/g,吸附时间为30min;戊二醛的质量分数为1.5%,交联温度30℃,交联反应pH=5.5,交联时间为30 min.得到的NCFs-Lip固定化膜的酶负载量(以含氮量计)为0.21%,酶活达31~35U/mL.红外分析显示NCFs-Lip固定化膜出现氨基酸的特征峰,SEM显示Lip颗粒聚集在膜表面;在50℃、70℃、90℃水浴中分别处理游离脂肪酶和NCFs-Lip固定化膜2h,未固定的脂肪酶的酶活保持率分别为45%、34%、22%,而NCFs-Lip固定化膜则分别保持了81%、64%和44%的酶活,说明与游离脂肪酶相比,NCFs-Lip固定化膜的温度稳定性显著提高.本研究采用吸附-交联-成膜"一锅端"完成NCFs-Lip固定化膜的制备,对脂肪酶的固定化是一种新的尝试,对推动纳米纤维素在固定化脂肪酶中的应用,具有重要的指导意义.
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