猪Ⅱ型圆环病毒ORF1、ORF2基因串联重组腺病毒的构建

• 作 者: 祝卫国 宋长绪 王贵平 杨增歧 王旭荣 黄忠 张春红
• 机 构: 广东省农业科学院兽医研究所,广州,广东,510640;西北农林科技大学动物科技学院,杨凌,陕西,712100广东省农业科学院兽医研究所,广州,广东,510640西北农林科技大学动物科技学院,杨凌,陕西
• 出 处: 中国畜牧兽医学会第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会
• 发表日期: 2005年5期
• 关键词: 猪Ⅱ型圆环病毒 ORF1基因 ORF2基因 重组腺病毒 PCR

利用PCR分别扩增猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)ORF1基因和ORF2基因,按正确的读码框以串联的方式依次克隆入pMD18-T载体.经过酶切鉴定和测序证实无误后,酶切目的基因亚克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV.构建成功的重组穿梭质粒经酶切和测序鉴定,含有完整的目的基因表达盒,穿梭质粒用PmeI线性化后可与腺病毒骨架载体pAdeasy-1在细菌(BJ5183)内进行同源重组,以产生重组腺病毒质粒.将PCR与PacI酶切鉴定的重组腺病毒质粒用PacI线性化后转染293细胞,在293细胞内包装成为完整的腺病毒,通过荧光显微镜观察、PCR检测可以确定ORF1基因和ORF2基因串连重组腺病毒构建成功。